[發明專利]含高表達NAMPT蛋白的外泌體及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202011618164.2
• 申請日: 2020-12-30
• 公開（公告）號: CN112921001A
• 公開（公告）日: 2021-06-08
• 發明（設計）人: 張建民;王靚
• 申請（專利權）人: 國典（北京）醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N15/54;A61K35/12;A61P25/00;A61P25/28;A61P39/06
• 代理公司: 北京尚誠知識產權代理有限公司 11322
• 代理人: 葉占洋;魯兵

1.一種含高表達NAMPT蛋白的外泌體，其特征在于，由高表達NAMPT蛋白的iPS細胞分泌所得，且所述外泌體中的NAMPT蛋白含量為普通的iPS細胞分泌的外泌體中NAMPT蛋白含量的2倍以上；所述高表達NAMPT蛋白的iPS細胞通過將體外合成的NAMPT mRNA轉染入iPS細胞獲得。

2.根據權利要求1所述的含高表達NAMPT蛋白的外泌體，其特征在于，還包含DNA、RNA、蛋白質和脂質等物質。

3.根據權利要求1或2所述的含高表達NAMPT蛋白的外泌體，其特征在于，所述含高表達NAMPT蛋白的外泌體的粒徑為30～150nm，表面標志物中CD9占比≥60％，CD63占比≥25％。

4.權利要求1-3中任一項所述的含高表達NAMPT蛋白的外泌體的制備方法，包括以下步驟：

T1：以NAMPT基因的編碼序列為模板體外合成NAMPT mRNA；

T2:將T1合成的NAMPT mRNA轉染入iPS細胞中，獲得高表達NAMPT蛋白的iPS細胞；

T3：培養步驟T2獲得的高表達NAMPT蛋白的iPS細胞，獲得含高表達NAMPT蛋白的外泌體。

5.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，步驟T1中，所述NAMPT基因的編碼序列為使用PCR引物擴增獲得，其中所述PCR引物的正向引物為序列表中SEQ ID NO:2所示；反向引物為序列表中SEQ ID NO:3所示。

6.根據權利要求4或5所述的制備方法，其特征在于，步驟T3的具體操作為：每天換入新鮮的iPS細胞培養液培養高表達NAMPT蛋白的iPS細胞，收集換出的培養液，從換出的培養液中分離純化獲得含高表達NAMPT蛋白的外泌體。

7.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述分離純化的方法選自差速離心法、超濾離心法、密度梯度離心法、沉淀法、磁珠免疫法、PS親和法、色譜法中的任一種或其組合。

8.權利要求1-3中任一項所述的含高表達NAMPT蛋白的外泌體在制備改善衰老細胞情況、改善神經元細胞生長狀態與放電協同性、保護神經元或治療或者改善神經退行性疾病的藥物中的應用。

9.一種改善衰老細胞的藥物，其包含權利要求1-3中任一項所述的含高表達NAMPT蛋白的外泌體。

10.一種保護神經元的藥物，其包含權利要求1-3中任一項所述的含高表達NAMPT蛋白的外泌體。