[發明專利]一種基于熒光RMA法多重檢測呼吸道合胞病毒亞型的引物探針組、試劑盒及其檢測方法

在審

• 申請號: 202011617830.0
• 申請日: 2020-12-30
• 公開（公告）號: CN112831601A
• 公開（公告）日: 2021-05-25
• 發明（設計）人: 劉祥舉;包建民;陳大為;陳龍;張瑤
• 申請（專利權）人: 濟南國益生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 濟南信在專利代理事務所(特殊普通合伙) 37271
• 代理人: 黃波

1.一種基于熒光RMA法多重檢測呼吸道合胞病毒亞型的引物和探針組，其特征在于，所述引物和探針組為根據RSV-A和RSV-B的G基因序列設計的引物和探針，其中，RSV-A的引物和探針序列為：

RSV-A-F：

5’-ATATGCAGCAACAATCCAACCTGCTGGGCTATCTG-3’；

RSV-A-R：

5’-CTCGGATGTTGTGGAGACTTGAGAAGGGCTTAGAT-3’；

RSV-A-P：

5’-ATCCAAAACTCACAAGTCAAATGGAAACC(FAM-dT)(THF)CCAC(BHQ-dT)CAACCTCCTCCGAA(C3-spacer)-3’；

RSV-B引物和探針序列為：

RSV-B-F：

5’-AAGACACGCAATCCAACAGCAATCCCTCTACTCAA-3’；

RSV-B-R：

5’-TCTATGGATCAGCAACTCCATGGTTATTTGCCCCA-3’；

RSV-B-P：

5’-ACACAAACACCCTCAGTATCCGAGCCCTCCACA(HEX-dT)CAAA(THF)(BHQ-dT)CCACCCAAAACCT(C3-spacer)-3’。

2.如權利要求1所述的一種基于熒光RMA法多重檢測呼吸道合胞病毒亞型的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中包括含有擴增反應試劑的檢測管、緩沖液、醋酸鎂、標準陽性質粒、無菌雙蒸水。

3.如權利要求2所述的一種基于熒光RMA法多重檢測呼吸道合胞病毒亞型的試劑盒，其特征在于，所述擴增反應試劑包括RSV-A和RSV-B的引物和探針、M-MLV逆轉錄酶、大腸桿菌RecA蛋白、UvsY蛋白、單鏈結合蛋白GP32、Bst聚合酶、核酸外切酶III、聚環氧乙烷、海藻糖、甘露醇、ATP、dNTPs、肌酸激酶和磷酸肌酸。

4.如權利要求3所述的一種基于熒光RMA法多重檢測呼吸道合胞病毒亞型的試劑盒，其特征在于，所述標準陽性質粒為含有呼吸道合胞病毒A型和B型擴增基因序列的重組質粒。