[發明專利]膠乳增強競爭免疫比濁檢測試劑盒和方法及劍麻皂素的應用

在審

• 申請號: 202011616064.6
• 申請日: 2020-12-30
• 公開（公告）號: CN114167063A
• 公開（公告）日: 2022-03-11
• 發明（設計）人: 曹廣源;吳馮波
• 申請（專利權）人: 上海云澤生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/543
• 代理公司: 上海弼興律師事務所 31283
• 代理人: 王衛彬;黃益澍

本發明公開了一種膠乳增強競爭免疫比濁檢測試劑盒、膠乳增強競爭免疫比濁檢測方法及劍麻皂素的應用。所述膠乳增強競爭免疫比濁檢測試劑盒包括試劑R1與試劑R2，所述試劑R1包含目標檢測物?載體復合物和劍麻皂素，所述試劑R2包含抗目標檢測物抗體偶聯的乳膠微球。本發明的膠乳增強競爭免疫比濁檢測試劑盒具有優異的準確度和穩定性，可與金標準HPLC檢測值高度一致。

技術領域

本發明涉及生物醫學檢測領域，具體涉及一種膠乳增強競爭免疫比濁檢測試劑盒、膠乳增強競爭免疫比濁檢測方法及劍麻皂素的應用。

背景技術

免疫比濁法(Turbidimetric inhibition immuno assay)是抗原抗體結合動態測定方法。其基本原理是：當抗原與抗體在特殊稀釋系統中反應而且比例合適(一般規定抗體過量)時，形成的可溶性免疫復合物在稀釋系統中的促聚劑(聚乙二醇等)的作用下，自液相析出，形成微粒，使反應液出現濁度。當抗體濃度固定時，形成的免疫復合物的量隨著檢樣中抗原量的增加而增加，反應液的濁度也隨之增加。通過測定反應液的濁度與一系列標準品對照，即可計算出檢樣中抗原的含量。

與普通免疫比濁法不同，膠乳增強競爭免疫比濁檢測法主要應用于檢測小分子藥物，其包括兩種模式：目標檢測物偶聯微球和抗體偶聯微球。其中，抗體偶聯微球的基本原理是：抗目標檢測物抗體偶聯于乳膠微球表面形成抗體偶聯的乳膠微球，樣本中的目標檢測物與試劑盒中目標檢測物-載體復合物競爭結合偶聯于乳膠微球表面的抗體，樣本中的目標檢測物濃度越高，乳膠微球表面抗體被其結合的程度越大，目標檢測物-載體復合物可引發的膠乳聚集程度(濁度)越小，反應體系的濁度大小與樣本中的目標檢測物濃度呈負相關，通過測定不同濁度反應體系的吸光度，建立校準曲線，計算樣本中目標檢測物的濃度。

但是，待測樣品中的小分子目標檢測物常常與蛋白有較高的結合率。例如，泊沙康唑小分子藥物與蛋白結合率98％。并且，樣本中還存在脂質等雜質。這些都對膠乳增強競爭免疫比濁檢測存在干擾，影響了檢測結果的準確度及穩定性。

為了解決此問題，現有報道嘗試在檢測試劑中加入曲拉通或吐溫-20，但實際效果并不理想，準確度和穩定性仍然不佳，未能完全解決上述問題。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是為了克服現有的膠乳增強競爭免疫比濁檢測法準確度和穩定性不高的缺陷，而提供一種膠乳增強競爭免疫比濁檢測試劑盒、膠乳增強競爭免疫比濁檢測方法及劍麻皂素的應用。本發明的膠乳增強競爭免疫比濁檢測試劑盒具有優異的準確度和穩定性，可與金標準HPLC檢測值高度一致。

本發明提供的技術方案之一為：一種膠乳增強競爭免疫比濁檢測試劑盒，其包括試劑R1與試劑R2，所述試劑R1包含目標檢測物-載體復合物和劍麻皂素，所述試劑R2包含抗目標檢測物抗體偶聯的乳膠微球。

本發明中，所述劍麻皂素在試劑R1中的濃度為表面活性劑的常規濃度，優選為0.1-1.0wt％，更優選為0.4-0.8wt％，進一步優選為0.6wt％。

本發明中，所述目標檢測物指膠乳增強競爭免疫比濁檢測可檢測的生物體或非生物體樣本中的各種小分子化合物，如氯氮平、奧氮平、泊沙康唑(posaconazole)、萬古霉素、三聚氰胺和伏克倫特羅等，優選為泊沙康唑。

本發明中，所述目標檢測物-載體復合物中所用載體為本領域常規的小分子半抗原載體，如蛋白質或多糖，具體如牛血清蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)或鑰孔血藍蛋白(KLH)等。所述的目標檢測物-載體復合物優選為泊沙康唑-牛血清蛋白。

本發明中，所述目標檢測物-載體復合物在試劑R1中的濃度按本領域常規，一般為200-600ng/ml，優選為300-500ng/ml，例如400ng/ml。

本發明中，所述抗目標檢測物抗體偶聯的乳膠微球中所用抗目標檢測物抗體為能與所述目標檢測物發生特異性免疫結合反應、具有抗體特有結構特征的蛋白。