[發(fā)明專利]一種烏藥湯高效液相特征圖譜的構(gòu)建方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011614363.6
• 申請(qǐng)日: 2020-12-31
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN114689776B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-05-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 周巧敏;胡昌江;張開(kāi)元;黃美華;陳蓉;梅國(guó)榮;黃宇;孫紀(jì)元
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/86
• 分類號(hào): G01N30/86;G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 成都天嘉專利事務(wù)所(普通合伙) 51211
• 代理人: 潘濤

1.一種烏藥湯高效液相特征圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）、供試品溶液的制備：取烏藥湯標(biāo)準(zhǔn)湯劑粉末1g，精密稱定，置錐形瓶中，加入95%乙醇25mL，超聲30min，至室溫后再加95%乙醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，得到供試品溶液；

（2）、對(duì)照品參照物溶液的制備：取木香烴內(nèi)酯、去氫木香烴內(nèi)酯和甘草苷對(duì)照品適量，精密稱定，加95%乙醇制成每1mL含0.2mg木香烴內(nèi)酯、每1mL含0.5mg去氫木香烴內(nèi)酯和每1mL含0.2mg甘草苷的溶液；

（3）、各單味飲片參照物溶液的制備：分別取烏藥標(biāo)準(zhǔn)湯劑粉末、木香標(biāo)準(zhǔn)湯劑粉末、炒香附標(biāo)準(zhǔn)湯劑粉末、當(dāng)歸標(biāo)準(zhǔn)湯劑粉末、甘草標(biāo)準(zhǔn)湯劑粉末各1g，精密稱定，置錐形瓶中，加入95%乙醇25mL，超聲30min，至室溫后再加95%乙醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，分別得到烏藥參照物溶液、木香參照物溶液、炒香附參照物溶液、當(dāng)歸參照物溶液、甘草參照物溶液；

（4）、各陰性對(duì)照溶液的制備：取95%乙醇濾過(guò)，取續(xù)濾液，作為不含有烏藥湯的空白陰性對(duì)照溶液；另分別取不含有烏藥的烏藥湯第一陰性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)湯劑、不含有木香的烏藥湯第二陰性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)湯劑、不含有炒香附的烏藥湯第三陰性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)湯劑、不含有當(dāng)歸的烏藥湯第四陰性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)湯劑、不含有甘草的烏藥湯第五陰性對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)湯劑各1g，精密稱定，置錐形瓶中，加入95%乙醇25mL，超聲30min，至室溫后再加95%乙醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，分別得到不含有烏藥的烏藥湯第一陰性對(duì)照溶液、不含有木香的烏藥湯第二陰性對(duì)照溶液、不含有炒香附的烏藥湯第三陰性對(duì)照溶液、不含有當(dāng)歸的烏藥湯第四陰性對(duì)照溶液、不含有甘草的烏藥湯第五陰性對(duì)照溶液；

（5）、色譜條件：色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，柱長(zhǎng)為250?mm，?內(nèi)徑為4.6mm，硅膠粒徑為5?μm；檢測(cè)器：二極管陣列檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm-365nm；柱溫：25℃-35℃；流速：0.8-1.2mL/min；流動(dòng)相：乙腈為流動(dòng)相A，以水為流動(dòng)相B，梯度脫洗；

（6）、測(cè)試：分別精密吸取供試品溶液、對(duì)照品參照物溶液、各單味飲片參照物溶液和各陰性對(duì)照溶液各10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種烏藥湯高效液相特征圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于：步驟（1）中，所述烏藥湯標(biāo)準(zhǔn)湯劑粉末制備方法為：取烏藥20g、木香20g、炒香附80g、當(dāng)歸20g、甘草20g，混合粉碎過(guò)2號(hào)篩得粗粉，取粗粉20g的加入400mL水浸泡30min，武火煮沸，文火煎煮30min，過(guò)濾，再加水400mL，武火煮沸，文火煎煮20min，過(guò)濾，合并濾液，冷凍干燥，即得。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種烏藥湯高效液相特征圖譜的構(gòu)建方法，其特征在于：步驟（3）中，所述烏藥標(biāo)準(zhǔn)湯劑粉末、木香標(biāo)準(zhǔn)湯劑粉末、炒香附標(biāo)準(zhǔn)湯劑粉末、當(dāng)歸標(biāo)準(zhǔn)湯劑粉末和甘草標(biāo)準(zhǔn)湯劑粉末制備方法為：

烏藥標(biāo)準(zhǔn)湯劑粉末制備：取烏藥20g的加入400mL水浸泡30min，武火煮沸，文火煎煮30min，過(guò)濾，再加水400mL，武火煮沸，文火煎煮20min，過(guò)濾，合并濾液，冷凍干燥，即得；

木香標(biāo)準(zhǔn)湯劑粉末制備：取木香20g的加入400mL水浸泡30min，武火煮沸，文火煎煮30min，過(guò)濾，再加水400mL，武火煮沸，文火煎煮20min，過(guò)濾，合并濾液，冷凍干燥，即得；

炒香附標(biāo)準(zhǔn)湯劑粉末制備：取炒香附20g的加入400mL水浸泡30min，武火煮沸，文火煎煮30min，過(guò)濾，再加水400mL，武火煮沸，文火煎煮20min，過(guò)濾，合并濾液，冷凍干燥，即得；

當(dāng)歸標(biāo)準(zhǔn)湯劑粉末制備：取當(dāng)歸20g的加入400mL水浸泡30min，武火煮沸，文火煎煮30min，過(guò)濾，再加水400mL，武火煮沸，文火煎煮20min，過(guò)濾，合并濾液，冷凍干燥，即得；

甘草標(biāo)準(zhǔn)湯劑粉末制備：取甘草20g的加入400mL水浸泡30min，武火煮沸，文火煎煮30min，過(guò)濾，再加水400mL，武火煮沸，文火煎煮20min，過(guò)濾，合并濾液，冷凍干燥，即得。