[發明專利]通過類器官馴化培養結直腸癌細胞系的方法及結直腸癌細胞系

有效

• 申請號: 202011612171.1
• 申請日: 2020-12-30
• 公開（公告）號: CN112608900B
• 公開（公告）日: 2022-02-08
• 發明（設計）人: 史媛媛;李程;肖金平;孫志堅
• 申請（專利權）人: 北京科途醫學科技有限公司;浙江科途醫學科技有限公司
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;C12R1/91
• 代理公司: 北京英創嘉友知識產權代理事務所(普通合伙) 11447
• 代理人: 耿超

本公開涉及一種通過類器官馴化培養結直腸癌細胞系的方法，利用類器官載體和馴化培養基對結直腸癌類器官中的結直腸癌單細胞進行多次馴化培養，在馴化培養過程中漸次降低類器官載體的使用量，使得結直腸癌類器官中的結直腸癌單細胞逐漸適應二維培養環境，并最終被馴化成永生化的結直腸癌細胞系。本公開創造性提出了一種全新的通過類器官馴化培養結直腸癌細胞系的方法，該方法能夠顯著縮短結直腸癌細胞系的建系時間、提升結直腸癌細胞系的建系成功率；此外，該方法的培養條件簡單，容易實現，能夠在體外低成本、高效率地從原代細胞建立人源結直腸癌細胞系。

技術領域

本公開涉及生物醫藥技術領域，具體地，涉及一種通過類器官馴化培養結直腸癌細胞系的方法以及利用該方法培養得到的結直腸癌細胞系。

背景技術

腫瘤細胞系是體外研究腫瘤細胞生物學特性、癌變機理以及腫瘤治療方案的良好模型。利用原發患者的腫瘤細胞培養得到的每個腫瘤細胞系都至少部分地保留有原發患者個體的致病信息，因此，建立的腫瘤細胞系越多，越有利于相關腫瘤的研究。與其它用于腫瘤研究的生物模型相比，腫瘤細胞系雖然丟失了很多與腫瘤組織相關的病理特征和遺傳細節，但是其優勢在于培養簡單、培養條件易達成且易控、培養成本低并且生長迅速。

傳統構建腫瘤細胞系的方法包括轉入腫瘤驅動基因法和自發永生化法。轉入腫瘤驅動基因法通過將諸如端粒酶基因、人乳頭瘤病毒基因和SV40大T抗原基因等腫瘤驅動基因轉入細胞中，使得細胞增殖形成永生化的細胞系，該方法引入了外源驅動基因，無法真正模擬腫瘤自身的發生機制。自發永生化法是對原代腫瘤細胞進行培養，待腫瘤細胞生長后，通過傳代培養除去快速生長的成纖維細胞，這種方法存在操作程序復雜、培養時間長、去除成纖維細胞污染困難等缺陷，而且腫瘤細胞在培養過程中發生自發永生化的概率極低，腫瘤細胞系的建系困難。

發明內容

本公開的目的是提供一種通過類器官馴化培養結直腸癌細胞系的方法以及利用該方法馴化培養得到的結直腸癌細胞系，該方法的培養條件簡單，能夠在體外低成本、高效率地培養得到能夠快速生長且遺傳穩定性強的結直腸癌細胞系。

為了實現上述目的，本公開提供一種通過類器官馴化培養結直腸癌細胞系的方法，該方法包括：

將結直腸癌類器官團進行消化，得到結直腸癌類器官中的結直腸癌單細胞；其中，所述結直腸癌類器官團中含有類器官載體和結直腸癌單細胞，所述結直腸癌類器官團的直徑不小于0.1mm，細胞團活力不小于80％；

依次利用摻有不同摻入比例類器官載體的馴化培養基對所述結直腸癌類器官中的結直腸癌單細胞進行馴化培養，得到貼壁生長率大于60％且細胞活力不小于80％的結直腸癌細胞系，其中，在所述馴化培養過程中，漸次減少所述類器官載體在所述馴化培養基中的摻入比例至0體積％。

可選地，在所述摻有不同摻入比例類器官載體的馴化培養基中，所述類器官載體的摻入比例至少包括第一摻入比例和第二摻入比例，所述第二摻入比例小于所述第一摻入比例，在所述馴化培養過程中，當與摻有第一摻入比例類器官載體的馴化培養基對應的第一馴化培養產物形成的單細胞懸液密度不小于3×10⁵個/ml且細胞活力不小于80％時，利用摻有第二摻入比例類器官載體的馴化培養基對所述第一馴化培養產物繼續進行馴化培養。

可選地，所述第一摻入比例不大于所述馴化培養基的5體積％。

可選地，在所述摻有不同摻入比例類器官載體的馴化培養基中，所述類器官載體的摻入比例包括所述馴化培養基的5體積％、1體積％和0體積％。

可選地，針對摻有任一摻入比例類器官載體的馴化培養基，所述馴化培養包括：

利用摻有當前摻入比例類器官載體的馴化培養基對結直腸癌單細胞進行重懸，得到細胞濃度為3～4×10⁴個/ml的結直腸癌單細胞懸液；