[發明專利]一種施氏鱘精子的保存方法與復蘇方法

在審

• 申請號: 202011610172.2
• 申請日: 2020-12-30
• 公開（公告）號: CN112806353A
• 公開（公告）日: 2021-05-18
• 發明（設計）人: 朱成科;呂光俊;蔣禮;楊成年;陽龍江;唐征縣;韓璐璐;彭小倩
• 申請（專利權）人: 西南大學
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02;C12N5/076
• 代理公司: 天津合正知識產權代理有限公司 12229
• 代理人: 邢月

本發明提供了一種施氏鱘精子的保存方法與復蘇方法，包括如下步驟：(1)將施氏鱘精子與5?10倍量的防凍劑混合均勻，然后分裝至無菌容器中；(2)將步驟(1)中分裝后的施氏鱘精子混合液預冷降溫至3?5℃，恒溫保存10?20分鐘，然后以?1℃/min的降溫速度將混合液降溫至?15??20℃，恒溫保存5?10分鐘，然后以?3℃/min的降溫速度將混合液降溫至?40??50℃，恒溫保存1?5分鐘，然后以?5℃/min的降溫速度將混合液降溫至?80??100℃，恒溫保存1?5分鐘；(3)將步驟(2)中得到的混合液放入液氮中，即成。本發明所述的施氏鱘精子的保存方法采用分裝與降溫恒溫的方式對精子進行冷凍保存，使精子在0?40℃的結晶危險區內減少晶體的生成，保證細胞的結構完整。

技術領域

本發明屬于施氏鱘繁育領域，尤其是涉及一種施氏鱘精子的保存方法與復蘇方法。

背景技術

施氏鱘屬硬骨魚綱、幅鰭亞綱、硬鱗總目、鱘形目，主要分布于阿穆爾河(中國黑龍江)流域，因具有生長速度快、抗病力強、經濟價值高等優點，已成為中國備受歡迎的養殖品種，占中國鱘魚總產量的50％，而且仍有增加的趨勢。但由于養殖技術粗放、養殖密度過高，導致疾病暴發頻率升高，給鱘養殖業的健康可持續性發展造成了極大阻礙。近年來，科研工作者在施氏鱘資源保護、人工蓄養、人工繁殖、胚胎發育、性腺發育等方面做了大量工作，為保護施氏鱘種質資源提供了理論依據。但對于施氏鱘的精子保存以及精子質量還有待進行深入研究。

發明內容

有鑒于此，本發明旨在克服現有技術中的缺陷，提出一種施氏鱘精子的保存方法與復蘇方法。

為達到上述目的，本發明的技術方案是這樣實現的：

一種施氏鱘精子的保存方法，包括如下步驟：

(1)將施氏鱘精子與5-10倍量的防凍劑混合均勻，然后分裝至無菌容器中；

(2)將步驟(1)中分裝后的施氏鱘精子混合液預冷降溫至3-5℃，恒溫保存10-20分鐘，然后以-1℃/min的降溫速度將混合液降溫至-15--20℃，恒溫保存5-10分鐘，然后以-3℃/min的降溫速度將混合液降溫至-40--50℃，恒溫保存1-5分鐘，然后以-5℃/min的降溫速度將混合液降溫至-80--100℃，恒溫保存1-5分鐘；

(3)將步驟(2)中得到的混合液放入液氮中，即成。

進一步，所述的步驟(1)中的防凍劑包括氯化鈉1-3份，氯化鉀1-3份，檸檬酸鈉5-10份，磷酸氫鈉1-3份，人參皂苷0.1-0.5份，大豆卵磷脂1-5份，青霉素0.1-0.5份，乳糖5-10份，VE 0.5-1份，培養水60-80份。

優選的，所述的步驟(1)中的防凍劑包括氯化鈉1.8份，氯化鉀1.5份，檸檬酸鈉6.5份，磷酸氫鈉1.2份，人參皂苷0.1份，大豆卵磷脂3份，青霉素0.15份，乳糖6.2份，VE 0.8份，培養水72份。

進一步，所述的培養水為施氏鱘養殖用水。

一種施氏鱘精子的復蘇方法，包括如下步驟：

(1)將冷凍后的無菌容器進行水浴加熱，水溫25-30℃，加熱至無菌容器中含有少量固體時，加入1-3倍量的激活劑，混合均勻后使其放置于2-5℃環境下直至全部融化即成。

進一步，所述的激活劑包括DMSO 1-5份，氯化鈉1-3份，氯化鉀1-2份，海藻糖6-8份，乳糖5-10份，蔗糖6-10份，白藜蘆醇1-5份，頭孢噻呋0.1-0.5份。

優選的，所述的激活劑包括氯化鈉3份，氯化鉀2份，海藻糖6.5份，乳糖8.5份，蔗糖7.5份，DMSO 3.2份，白藜蘆醇4份，頭孢噻呋0.2份。

進一步，所述的激活劑的pH值為7.8-8.5。

相對于現有技術，本發明具有以下優勢：