[發明專利]一種施氏鱘精子的保存方法與復蘇方法

在審

• 申請號: 202011610172.2
• 申請日: 2020-12-30
• 公開（公告）號: CN112806353A
• 公開（公告）日: 2021-05-18
• 發明（設計）人: 朱成科;呂光俊;蔣禮;楊成年;陽龍江;唐征縣;韓璐璐;彭小倩
• 申請（專利權）人: 西南大學
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02;C12N5/076
• 代理公司: 天津合正知識產權代理有限公司 12229
• 代理人: 邢月

1.一種施氏鱘精子的保存方法，其特征在于：包括如下步驟：

(1)將施氏鱘精子與5-10倍量的防凍劑混合均勻，然后分裝至無菌容器中；

(2)將步驟(1)中分裝后的施氏鱘精子混合液預冷降溫至3-5℃，恒溫保存10-20分鐘，然后以-1℃/min的降溫速度將混合液降溫至-15--20℃，恒溫保存5-10分鐘，然后以-3℃/min的降溫速度將混合液降溫至-40--50℃，恒溫保存1-5分鐘，然后以-5℃/min的降溫速度將混合液降溫至-80--100℃，恒溫保存1-5分鐘；

(3)將步驟(2)中得到的混合液放入液氮中，即成。

2.根據權利要求1所述的施氏鱘精子的保存方法，其特征在于：所述的步驟(1)中的防凍劑包括氯化鈉1-3份，氯化鉀1-3份，檸檬酸鈉5-10份，磷酸氫鈉1-3份，人參皂苷0.1-0.5份，大豆卵磷脂1-5份，青霉素0.1-0.5份，乳糖5-10份，VE 0.5-1份，培養水60-80份。

3.根據權利要求2所述的施氏鱘精子的保存方法，其特征在于：所述的步驟(1)中的防凍劑包括氯化鈉1.8份，氯化鉀1.5份，檸檬酸鈉6.5份，磷酸氫鈉1.2份，人參皂苷0.1份，大豆卵磷脂3份，青霉素0.15份，乳糖6.2份，VE 0.8份，培養水72份。

4.根據權利要求2所述的施氏鱘精子的保存方法，其特征在于：所述的培養水為施氏鱘養殖用水。

5.一種施氏鱘精子的復蘇方法，其特征在于：包括如下步驟：

(1)將冷凍后的無菌容器進行水浴加熱，水溫25-30℃，加熱至無菌容器中含有少量固體時，加入1-3倍量的激活劑，混合均勻后使其放置于2-5℃環境下直至全部融化即成。

6.根據權利要求5所述的施氏鱘精子的復蘇方法，其特征在于：所述的激活劑包括DMSO1-5份，氯化鈉1-3份，氯化鉀1-2份，海藻糖6-8份，乳糖5-10份，蔗糖6-10份，白藜蘆醇1-5份，頭孢噻呋0.1-0.5份。

7.根據權利要求6所述的施氏鱘精子的復蘇方法，其特征在于：所述的激活劑包括氯化鈉3份，氯化鉀2份，海藻糖6.5份，乳糖8.5份，蔗糖7.5份，DMSO 3.2份，白藜蘆醇4份，頭孢噻呋0.2份。

8.根據權利要求6所述的施氏鱘精子的復蘇方法，其特征在于：所述的激活劑的pH值為7.8-8.5。