[發(fā)明專利]一種自然共生的混合培養(yǎng)物及其降解秸稈生產(chǎn)香豆酸酯酶的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011609489.4
• 申請(qǐng)日: 2020-12-30
• 公開（公告）號(hào): CN112553127B
• 公開（公告）日: 2021-11-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 魏亞琴;李偉;王治業(yè)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 甘肅省科學(xué)院生物研究所
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12N1/14;C12N9/18;C12R1/01;C12R1/645
• 代理公司: 北京力量專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11504
• 代理人: 戴治娟

1.一種自然共生的混合培養(yǎng)物，其特征在于，所述的混合培養(yǎng)物由厭氧真菌(Neocallimastix frontalis)和甲烷菌(Methanobrevibacter gottschalkii)組成，命名為YakQH5，所述的混合培養(yǎng)物YakQH5于2020年3月9日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)為CGMCC No.19299，保藏地址為：北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，電話：[phone]。

2.一種發(fā)酵秸稈生產(chǎn)香豆酸酯酶的方法，其特征在于，使用權(quán)利要求1所述的混合培養(yǎng)物YakQH5為發(fā)酵菌劑；所述的方法包括如下步驟：

(1)混合培養(yǎng)物YakQH5菌劑的制備：以10％v/v接種量向以小麥秸稈為底物的厭氧培養(yǎng)基中接入混合培養(yǎng)物YakQH5，加入復(fù)合抗生素厭氧培養(yǎng)即得到高活力的菌劑；

(2)生產(chǎn)香豆酸酯酶：吸取步驟(1)所得菌劑以10％v/v接種量接入以1％w/v秸稈為底物的厭氧培養(yǎng)基中，加入1％v/v復(fù)合抗生素厭氧培養(yǎng)；

所述的步驟(1)中厭氧培養(yǎng)的溫度為39℃，時(shí)間為72小時(shí)；所述的步驟(2)中厭氧培養(yǎng)的溫度為39℃，時(shí)間為5天；所述的步驟(2)中的復(fù)合抗生素為青霉素鈉和硫酸鏈霉素，在厭氧培養(yǎng)基中的濃度分別為1600IU/mL和2000IU/mL；

所述的厭氧培養(yǎng)基配方為：酵母膏1.0g，蛋白胨1.0g，NaHCO₃ 7.0g，刃天青1.0g/L1mL，L-半胱氨酸鹽酸鹽1.7g，晨飼前采集瘤胃液8000×g，4℃離心20min后的上清170mL，鹽溶液Ⅰ82.5mL，鹽溶液II 16.5mL，蒸餾水定容至1000mL；所述的鹽溶液I配制步驟如下：NaCl 6g，(NH₄)₂SO₄ 3g，KH₂PO₄ 3g，CaCl₂·2H₂O 0.4g，MgSO₄·2H₂O 0.6g，蒸餾水定容至1000mL；所述的鹽溶液II配制步驟如下：4g K₂HPO₄，蒸餾水定容至1000mL；所述的步驟(2)加入秸稈底物后除氧，充入二氧化碳，高溫高壓滅菌；所述的步驟(2)加入的秸稈為小麥秸稈、玉米秸稈、水稻秸稈、燕麥秸稈和高粱秸稈的任一種或幾種。

3.如權(quán)利要求2所述的生產(chǎn)香豆酸酯酶的方法，其特征在于，所述的步驟(2)加入的秸稈為高粱秸稈。