[發(fā)明專利]一種DNA雜交增強(qiáng)液及其制備方法與應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011607529.1
• 申請日: 2020-12-30
• 公開（公告）號: CN112626180A
• 公開（公告）日: 2021-04-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊德剛;高云周;趙偉;張榮;劉明坤;葉鋒
• 申請（專利權(quán)）人: 北京思爾成生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12Q1/6832
• 分類號: C12Q1/6832;C12Q1/6841
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢

本發(fā)明公開了一種DNA雜交增強(qiáng)液及其制備方法與應(yīng)用。所述DNA雜交增強(qiáng)液包括如下濃度組分組成：緩沖劑的溶液作為溶質(zhì)；雜交促進(jìn)劑：聚合物2～60g/100ml，有機(jī)溶劑體積百分比10～80％，蛋白質(zhì)質(zhì)量體積百分比0.5～10g/100ml；鹽類：1mM～750mM。其制備方法包括如下步驟：所述緩沖液中加入所述雜交促進(jìn)劑混合，最后入所述鹽類混合，即得到所述的DNA雜交增強(qiáng)液。本發(fā)明所述的DNA雜交增強(qiáng)液應(yīng)用于在DNAFISH產(chǎn)品中。本發(fā)明縮短了雜交時間，雜交效果好，具有很高的特異性和敏感性，探針用量減少到原來的五分之一，節(jié)約了探針成本。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及原位雜交的分子分析領(lǐng)域，涉及一種DNA雜交增強(qiáng)液及其制備方法與應(yīng)用，具體涉及一種DNA雜交增強(qiáng)液和可與DNA分子探針結(jié)合使用的一種DNA雜交增強(qiáng)液的制備方法。

背景技術(shù)

原位雜交技術(shù)(Insituhybridization，ISH)是分子生物學(xué)、組織化學(xué)及細(xì)胞學(xué)相結(jié)合而產(chǎn)生的一門技術(shù)。

原位雜交技術(shù)可分為基因組原位雜交技術(shù)、熒光原位雜交技術(shù)、多彩色熒光原位雜交技術(shù)和原位PCR。

熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization,FISH)是在20世紀(jì)80年代末在放射性原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種非放射性分子細(xì)胞遺傳技術(shù),以熒光標(biāo)記取代同位素標(biāo)記而形成的一種新的原位雜交方法。

FISH的基本原理是將DNA(或RNA)探針用特殊的核苷酸分子標(biāo)記,然后將探針直接雜交到染色體或DNA纖維切片上，再用與熒光素分子偶聯(lián)的單克隆抗體與探針分子特異性結(jié)合來檢測DNA序列在染色體或DNA纖維切片上的定性、定位、相對定量分析。

FISH具有安全、快速、靈敏度高、探針能長期保存、能同時顯示多種顏色等優(yōu)點,不但能顯示中期分裂相,還能顯示于間期核.同時在熒光原位雜交基礎(chǔ)上又發(fā)展了多彩色熒光原位雜交技術(shù)和染色質(zhì)纖維熒光原位雜交技術(shù)。

在目前腫瘤學(xué)中使用的分子分析技術(shù)中，熒光(FISH)原位雜交被廣泛應(yīng)用于檢測染色體的畸形，如擴(kuò)增、非整倍體、斷裂、缺失、重排。FISH的敏感性和特異性主要取決于三個因素中的至少一個：(A)變性條件；(B)雜交條件；以及(C)雜交后洗滌條件。變性之后的雜交是最耗時間的，在傳統(tǒng)的熒光原位雜交(FISH)協(xié)議中，雜交需要14到24小時，甚至可能需要72小時。

甲酰胺的使用干擾核酸堿基的Watson-Crick結(jié)合位點，從而干擾互補(bǔ)核酸堿基之間的氫鍵，是降低互補(bǔ)鏈退火溫度(TM)的唯一途徑，這是變性步驟所必需的。然而，盡管交變劑的使用降低了TM，但甲酰胺明顯延長了雜交時間。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種DNA雜交增強(qiáng)液及其制備方法與應(yīng)用，本發(fā)明能大幅度的促進(jìn)DNA分子雜交的效率和克服熒光原位雜交中雜交時間過長。

本發(fā)明提供的一種DNA雜交增強(qiáng)液，該DNA雜交增強(qiáng)液包括如下濃度組分組成：

緩沖劑的溶液作為溶質(zhì)；

雜交促進(jìn)劑：聚合物2～60g/100ml，有機(jī)溶劑體積百分比10～80％，蛋白質(zhì)質(zhì)量體積百分比0.5～10g/100ml；

鹽類：1mM～750mM。

上述的DNA雜交增強(qiáng)液中，所述緩沖劑可包括SSC、HEPES、TRIS、磷酸鉀和檸檬酸中的至少一種，提供雜交反應(yīng)體系中所需的pH值；

所述DNA雜交增強(qiáng)液中所述緩沖劑的質(zhì)量體積終濃度可為0.4％～8.8％。

進(jìn)一步的，所述DNA雜交增強(qiáng)液的最終pH值可為6～8。

上述的DNA雜交增強(qiáng)液中，所述聚合物選自Ficoll、PVP、肝素、葡聚糖硫酸鹽中的至少一種；