[發(fā)明專利]一種枸櫞酸西地那非中有關(guān)物質(zhì)N-甲基哌嗪的檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011603814.6
• 申請(qǐng)日: 2020-12-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112798719B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-03-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 盧念紅;李玉芳;夏家榮;徐榮秀;譚瑤;傅啟昌;牟祥
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 植恩生物技術(shù)股份有限公司;重慶柳江醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/06
• 分類號(hào): G01N30/06;G01N30/74
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明公開(kāi)了一種枸櫞酸西地那非中有關(guān)物質(zhì)N?甲基哌嗪的檢測(cè)方法，所述的檢測(cè)方法為衍生?高效液相色譜法。所述的衍生方法為加入適量苯甲酰氯衍生試劑，經(jīng)衍生化反應(yīng)后，再用稀釋劑稀釋至所需濃度，得衍生待測(cè)溶液；所述高效液相色譜法采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的色譜柱、以緩沖鹽溶液和乙腈為流動(dòng)相對(duì)衍生反應(yīng)待測(cè)液進(jìn)行分離檢測(cè)的衍生?高效液相色譜法。所述衍生?高效液相色譜法有效解決了N?甲基哌嗪雜質(zhì)在GC檢測(cè)法中拖尾嚴(yán)重、靈敏度低且響應(yīng)不成線性的問(wèn)題。所述衍生?高效液相色譜法實(shí)用性強(qiáng)，檢測(cè)過(guò)程簡(jiǎn)單、快捷、靈敏度好。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于藥物分析化學(xué)領(lǐng)域，涉及枸櫞酸西地那非有關(guān)物質(zhì)N-甲基哌嗪的檢測(cè)方法，具體涉及采用衍生-高效液相色譜法分離測(cè)定枸櫞酸西地那非有關(guān)物質(zhì)N-甲基哌嗪含量的檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

N-甲基哌嗪是合成枸櫞酸西地那非的重要物料，枸櫞酸西地那非可能會(huì)發(fā)生降解反應(yīng)產(chǎn)生N-甲基哌嗪，因此枸櫞酸西地那非中可能含有有關(guān)物質(zhì)N-甲基哌嗪，需要對(duì)其進(jìn)行研究控制。目前報(bào)道的檢測(cè)N-甲基哌嗪含量的方法主要有高氯酸滴定法、氣相色譜法、質(zhì)譜法。

高氯酸滴定法僅適用于高濃度N-甲基哌嗪含量的測(cè)定，且枸櫞酸西地那非也會(huì)與高氯酸發(fā)生反應(yīng)，因此限度0.1％水平的N-甲基哌嗪的含量無(wú)法用高氯酸滴定法準(zhǔn)確測(cè)定。

文獻(xiàn)報(bào)道可以用氣相色譜法檢測(cè)N-甲基哌嗪的含量，但在進(jìn)行用氣相色譜法檢測(cè)枸櫞酸西地那非有關(guān)物質(zhì)N-甲基哌嗪含量的方法開(kāi)發(fā)時(shí)發(fā)現(xiàn)，不同色譜柱條件下，拖尾較嚴(yán)重，可能因?yàn)镹-甲基哌嗪為弱堿性化合物且含有N-H鍵所致，從而導(dǎo)致1ug/ml、10ug/ml、100ug/ml的N-甲基哌嗪的響應(yīng)不成線性，進(jìn)而導(dǎo)致靈敏度較低，所用供試品枸櫞酸西地那非濃度較高等問(wèn)題。

質(zhì)譜法儀器設(shè)備較昂貴，檢測(cè)費(fèi)用較高，不適宜工廠QC檢測(cè)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種衍生-高效液相色譜法進(jìn)行枸櫞酸西地那非中有關(guān)物質(zhì)N-甲基哌嗪含量的檢測(cè)方法；該檢測(cè)方法的檢測(cè)靈敏度高、線性好、所需供試品濃度較小、分析時(shí)間短等，有效解決了現(xiàn)有技術(shù)中存在的靈敏度低、低濃度時(shí)響應(yīng)不成線性導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確的問(wèn)題。可以對(duì)N-甲基哌嗪進(jìn)行有效控制，保證了枸櫞酸西地那非的質(zhì)量。

在本發(fā)明的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種枸櫞酸西地那非中有關(guān)物質(zhì)N-甲基哌嗪含量的檢測(cè)方法，所述的檢測(cè)方法采用柱前衍生-高效液相色譜法：

柱前衍生采用衍生試劑與枸櫞酸西地那非中有關(guān)物質(zhì)N-甲基哌嗪反應(yīng)形成帶共軛基團(tuán)的衍生產(chǎn)物；

在本發(fā)明的實(shí)施方案中，本發(fā)明所述的檢測(cè)方法，其中，衍生試劑為苯甲酰氯、4-氟苯甲酰氯或4-甲基苯磺酰氯，優(yōu)選苯甲酰氯。

在本發(fā)明的實(shí)施方案中，本發(fā)明所述的檢測(cè)方法，其中，衍生試劑與N-甲基哌嗪的衍生反應(yīng)如下式：

在本發(fā)明的實(shí)施方案中，本發(fā)明所述的檢測(cè)方法，其中，所述高效液相色譜法采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的色譜柱、以緩沖鹽水溶液為流動(dòng)相A和乙腈為流動(dòng)相B。

在本發(fā)明的實(shí)施方案中，本發(fā)明所述的檢測(cè)方法，其中，所述緩沖鹽水溶液選自以體積比計(jì)0.1％磷酸水溶液，三乙胺調(diào)pH至7.0；或20mM磷酸二氫鉀水溶液，120g/L氫氧化鉀溶液調(diào)pH至6.5，優(yōu)選地，為20mM磷酸二氫鉀水溶液，120g/L氫氧化鉀溶液調(diào)pH至6.5。

在本發(fā)明的實(shí)施方案中，本發(fā)明所述的檢測(cè)方法，其中，所述高效液相色譜方法的色譜柱選自十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的色譜柱，優(yōu)選ZORBAX XDB-C18、InertSustain C18、ZORBAX SB-C18、或ZORBAX Eclipse Plus C18；

在本發(fā)明的實(shí)施方案中，本發(fā)明所述的檢測(cè)方法，其中，采用梯度進(jìn)行洗脫的，所述流動(dòng)相A與流動(dòng)相B體積比列為如下梯度：