[發明專利]一種枸櫞酸西地那非中有關物質N-甲基哌嗪的檢測方法

有效

• 申請號: 202011603814.6
• 申請日: 2020-12-29
• 公開（公告）號: CN112798719B
• 公開（公告）日: 2023-03-17
• 發明（設計）人: 盧念紅;李玉芳;夏家榮;徐榮秀;譚瑤;傅啟昌;牟祥
• 申請（專利權）人: 植恩生物技術股份有限公司;重慶柳江醫藥科技有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/74
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種枸櫞酸西地那非中有關物質N?甲基哌嗪的檢測方法，所述的檢測方法為衍生?高效液相色譜法。所述的衍生方法為加入適量苯甲酰氯衍生試劑，經衍生化反應后，再用稀釋劑稀釋至所需濃度，得衍生待測溶液；所述高效液相色譜法采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的色譜柱、以緩沖鹽溶液和乙腈為流動相對衍生反應待測液進行分離檢測的衍生?高效液相色譜法。所述衍生?高效液相色譜法有效解決了N?甲基哌嗪雜質在GC檢測法中拖尾嚴重、靈敏度低且響應不成線性的問題。所述衍生?高效液相色譜法實用性強，檢測過程簡單、快捷、靈敏度好。

技術領域

本發明屬于藥物分析化學領域，涉及枸櫞酸西地那非有關物質N-甲基哌嗪的檢測方法，具體涉及采用衍生-高效液相色譜法分離測定枸櫞酸西地那非有關物質N-甲基哌嗪含量的檢測方法。

背景技術

N-甲基哌嗪是合成枸櫞酸西地那非的重要物料，枸櫞酸西地那非可能會發生降解反應產生N-甲基哌嗪，因此枸櫞酸西地那非中可能含有有關物質N-甲基哌嗪，需要對其進行研究控制。目前報道的檢測N-甲基哌嗪含量的方法主要有高氯酸滴定法、氣相色譜法、質譜法。

高氯酸滴定法僅適用于高濃度N-甲基哌嗪含量的測定，且枸櫞酸西地那非也會與高氯酸發生反應，因此限度0.1％水平的N-甲基哌嗪的含量無法用高氯酸滴定法準確測定。

文獻報道可以用氣相色譜法檢測N-甲基哌嗪的含量，但在進行用氣相色譜法檢測枸櫞酸西地那非有關物質N-甲基哌嗪含量的方法開發時發現，不同色譜柱條件下，拖尾較嚴重，可能因為N-甲基哌嗪為弱堿性化合物且含有N-H鍵所致，從而導致1ug/ml、10ug/ml、100ug/ml的N-甲基哌嗪的響應不成線性，進而導致靈敏度較低，所用供試品枸櫞酸西地那非濃度較高等問題。

質譜法儀器設備較昂貴，檢測費用較高，不適宜工廠QC檢測。

發明內容

本發明提供了一種衍生-高效液相色譜法進行枸櫞酸西地那非中有關物質N-甲基哌嗪含量的檢測方法；該檢測方法的檢測靈敏度高、線性好、所需供試品濃度較小、分析時間短等，有效解決了現有技術中存在的靈敏度低、低濃度時響應不成線性導致檢測結果不準確的問題。可以對N-甲基哌嗪進行有效控制，保證了枸櫞酸西地那非的質量。

在本發明的實施方案中，本發明提供了一種枸櫞酸西地那非中有關物質N-甲基哌嗪含量的檢測方法，所述的檢測方法采用柱前衍生-高效液相色譜法：

柱前衍生采用衍生試劑與枸櫞酸西地那非中有關物質N-甲基哌嗪反應形成帶共軛基團的衍生產物；

在本發明的實施方案中，本發明所述的檢測方法，其中，衍生試劑為苯甲酰氯、4-氟苯甲酰氯或4-甲基苯磺酰氯，優選苯甲酰氯。

在本發明的實施方案中，本發明所述的檢測方法，其中，衍生試劑與N-甲基哌嗪的衍生反應如下式：

在本發明的實施方案中，本發明所述的檢測方法，其中，所述高效液相色譜法采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的色譜柱、以緩沖鹽水溶液為流動相A和乙腈為流動相B。

在本發明的實施方案中，本發明所述的檢測方法，其中，所述緩沖鹽水溶液選自以體積比計0.1％磷酸水溶液，三乙胺調pH至7.0；或20mM磷酸二氫鉀水溶液，120g/L氫氧化鉀溶液調pH至6.5，優選地，為20mM磷酸二氫鉀水溶液，120g/L氫氧化鉀溶液調pH至6.5。

在本發明的實施方案中，本發明所述的檢測方法，其中，所述高效液相色譜方法的色譜柱選自十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相的色譜柱，優選ZORBAX XDB-C18、InertSustain C18、ZORBAX SB-C18、或ZORBAX Eclipse Plus C18；

在本發明的實施方案中，本發明所述的檢測方法，其中，采用梯度進行洗脫的，所述流動相A與流動相B體積比列為如下梯度：