[發(fā)明專利]一種同時(shí)靶向CD19和BCMA的雙靶點(diǎn)嵌合抗原受體及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011602001.5
• 申請(qǐng)日: 2020-12-29
• 公開（公告）號(hào): CN112592927A
• 公開（公告）日: 2021-04-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 姜鈺超;王苗苗;繆佳;劉根桃;吳國(guó)祥
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海科棋藥業(yè)科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/62
• 分類號(hào): C12N15/62;C12N15/13;C12N15/867;C12N5/10;C07K19/00;A61K39/00;A61P35/00;A61P35/02
• 代理公司: 上海申新律師事務(wù)所 31272
• 代理人: 郎祺

本發(fā)明提供了一種同時(shí)靶向CD19和BCMA的雙靶點(diǎn)嵌合抗原受體及編碼其的核苷酸和其應(yīng)用。該多核苷酸的序列為含依次連接的靶向CD19的嵌合抗原受體的編碼序列、連接肽的編碼序列和靶向BCMA的嵌合抗原受體的編碼序列的多核苷酸序列或其互補(bǔ)序列。本發(fā)明提供的表達(dá)同時(shí)靶向CD19和BCMA的雙靶點(diǎn)嵌合抗原受體中靶向BCMA的CAR結(jié)構(gòu)與靶向CD19的CAR結(jié)構(gòu)完全獨(dú)立并以只切割肽串聯(lián)，促使BCMA靶點(diǎn)和CD19靶點(diǎn)對(duì)CAR?T細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)的作用更獨(dú)立、更有效，此外，表達(dá)該雙靶點(diǎn)嵌合抗原受體的T細(xì)胞對(duì)CD19和BCMA雙陽(yáng)靶細(xì)胞更有效的殺傷，防止因靶點(diǎn)丟失導(dǎo)致的疾病進(jìn)展，提高了治療CD19和BCMA介導(dǎo)的疾病(特別是多發(fā)性骨髓瘤)的潛在療效。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種同時(shí)靶向CD19和BCMA的雙靶點(diǎn)嵌合抗原受體及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

多發(fā)性骨髓瘤是一種惡性漿細(xì)胞疾病，表現(xiàn)為骨髓漿細(xì)胞惡性克隆性增生，分泌單克隆免疫球蛋白或其片段(M蛋白)，導(dǎo)致骨骼、腎臟等相關(guān)靶器官或組織損傷，常見臨床表現(xiàn)為骨痛、貧血、腎功能不全、感染等[N Engl J Med,2011.364(11):p.1046-60.]。目前多發(fā)性骨髓瘤為血液系統(tǒng)第二大惡性腫瘤，占血液系統(tǒng)惡性腫瘤的10％，多發(fā)病于男性，其發(fā)病率隨著年齡的增長(zhǎng)逐年增高，近幾年更是有年輕化的趨勢(shì)[CA CancerJ Clin,2014.64(1):p.9-29.]。

B細(xì)胞成熟抗原(B-cell maturation antigen，BCMA)，又稱CD269，由184個(gè)氨基酸殘基組成，其胞內(nèi)區(qū)含80個(gè)氨基酸殘基，胞外區(qū)序列很短，只有一個(gè)糖類識(shí)別結(jié)構(gòu)域，為B細(xì)胞表面分子。BCMA屬于缺少信號(hào)肽的I型跨膜信號(hào)蛋白，是腫瘤壞死因子受體家族(TNFR)一員，它可分別與B細(xì)胞激活因子BAFF或增殖誘導(dǎo)配體(aproliferation induced ligand，APRIL)兩種配體相結(jié)合[Curr Opin Struct Biol,2004.14(2):p.154-60.]。在正常組織中，BCMA表達(dá)于成熟B細(xì)胞和漿細(xì)胞表面，BCMA基因剔除小鼠免疫系統(tǒng)表現(xiàn)正常，有正常的脾結(jié)構(gòu)，B淋巴細(xì)胞的發(fā)育正常，但漿細(xì)胞數(shù)量明顯減少，證明BCMA在維持漿細(xì)胞的存活中起了重要的作用，其機(jī)制主要包括BCMA-BAFF蛋白結(jié)合，并上調(diào)抗凋亡基因Bcl-2，Mcl-1及Bclw等，維持細(xì)胞生長(zhǎng)[J Exp Med,2004.199(1):p.91-8.]。同樣地，該機(jī)制也在骨髓瘤細(xì)胞中發(fā)揮了功能，對(duì)骨髓瘤細(xì)胞的惡性增生起了重要的促進(jìn)作用[Blood,2004.103(8):p.3148-57.]。研究表明，BCMA普遍表達(dá)于多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系，在多發(fā)性骨髓瘤患者中的檢測(cè)也得到了一致性的結(jié)果[Blood,2004.103(2):p.689-94.]。Kochenderfer等在已有報(bào)道的基礎(chǔ)上，又聯(lián)合應(yīng)用Q-PCR、流式細(xì)胞術(shù)和免疫組化方法深入研究了BCMA的表達(dá)特征，確認(rèn)BCMA在成熟B細(xì)胞、漿細(xì)胞之外的正常人體組織無(wú)表達(dá)，且在CD34⁺造血細(xì)胞中也無(wú)表達(dá)[Clin Cancer Res,2013.19(8):p.2048-60.]。結(jié)合BCMA表達(dá)特征與CD19的高度相似性，以及抗CD19 CAR-T細(xì)胞治療的成功進(jìn)展，表明BCMA可以作為CAR-T細(xì)胞的靶點(diǎn)之一用于多發(fā)性骨髓瘤的細(xì)胞免疫治療。