[發明專利]一種高效構建細胞文庫的電擊轉化方法在審
| 申請號： | 202011601166.0 | 申請日： | 2020-12-29 |
| 公開（公告）號： | CN113122578A | 公開（公告）日： | 2021-07-16 |
| 發明（設計）人： | 金鳴;袁鵬飛;劉娜;蘇美華 | 申請（專利權）人： | 博雅緝因（北京）生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/867 | 分類號： | C12N15/867;C12N15/864;C12N15/87;C12N15/55;C40B50/06 |
| 代理公司： | 北京彩和律師事務所 11688 | 代理人： | 張紅春 |
| 地址： | 102206 北京*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 高效 構建 細胞 文庫 電擊 轉化 方法 | ||
1.一種高效構建細胞文庫的方法，包括：
1)構建sgRNA表達細胞；和
2)將Cas9 mRNA通過電擊轉化導入所述sgRNA表達細胞中。
2.根據權利要求1所述的方法，其中步驟1)中，通過病毒侵染方式構建sgRNA表達細胞。
3.根據權利要求2所述的方法，其中所述病毒侵染方式中病毒感染復數不超過0.3。
4.根據權利要求3所述的方法，其中所述病毒侵染方式中病毒感染復數為0.1-0.3。
5.根據權利要求1-4任一項所述的方法，其中所述病毒為AVV病毒或慢病毒。
6.根據權利要求1-5任一項所述的方法，其中所述Cas9 mRNA與所述sgRNA表達細胞的比值為約1X106-1X107個細胞每1μg-120μg Cas9 mRNA，優選為約1X106-1X107個細胞每2μg-100μg Cas9 mRNA。
7.根據權利要求1-6任一項所述的方法，其中當所述電擊轉化的細胞數為約1X106時，所述電擊轉化的電壓為200-400V，時長為1ms，脈沖數為1個。
8.根據權利要求1-6任一項所述的方法，其中當所述電擊轉化的細胞數為約1X107時，所述電擊轉化的電壓為400-700V，時長為1ms，脈沖數為2個。
9.根據權利要求7所述的方法，所述電擊轉化的電壓為250-400V、300-400V、250-350V、250-300V或200-300V。
10.根據權利要求8所述的方法，所述電擊轉化的電壓為400-650V、400-600V、400-550V、400-500V、400-450V、450-700V、500-700V、550-700V或600-700V。
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