[發明專利]一種低分子量苜蓿多糖及其制備方法與調節腸道菌群的應用

有效

• 申請號: 202011600865.3
• 申請日: 2020-12-30
• 公開（公告）號: CN112724270B
• 公開（公告）日: 2022-09-02
• 發明（設計）人: 李鳳偉;彭夢黎;余曉紅;王篤軍;商曰玲;閔曉冉;朱袁平
• 申請（專利權）人: 鹽城工學院
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61P1/00
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 曹翠珍

本發明公開了一種低分子量苜蓿多糖及其制備方法與調節腸道菌群的應用，低分子量苜蓿多糖的分子量為3~6 KDa，單糖組成包括0.75~1.16%甘露糖、68.57~81.02%葡萄糖、1.10~4.53%半乳糖；通過纖維素酶提取、Sevage試劑脫蛋白、棉絮狀DEAE?52纖維素脫色、顆粒狀DEAE?52纖維素分離純化制備得到；具有調節腸道菌群的作用，促進雙歧桿菌、乳酸菌等益生菌的增長，抑制檸檬酸桿菌、埃希菌等致病菌的生長，并酵解產生乙酸等短鏈脂肪酸，降低腸道的pH值。

技術領域

本發明屬于植物多糖技術領域，具體涉及一種低分子量苜蓿多糖及其制備方法與調節腸道菌群的應用。

背景技術

苜蓿為豆科苜蓿屬多年生草本植物，是世界上栽培面積最廣的牧草品種之一；苜蓿也是一種傳統的中草藥，具有清熱解毒、涼血通淋、益氣健脾、溫腎、降血脂等功效。苜蓿中含有多糖、皂苷、黃酮、多酚等生物活性成分，其中苜蓿多糖具有抗氧化、抗炎癥、抗腫瘤、免疫調節等多種藥理活性，還可以用于促進家禽類的生產，且毒副作用小，已成為近年來的研究熱點之一。

苜蓿多糖一般采用堿提取法、水提取法或酶提取法提取，后經分離純化得到。CN103980371A公開了一種分子量為4.5~66.6KDa，由阿拉伯糖、半乳糖、半乳糖醛酸等多種單糖組成的苜蓿多糖；該苜蓿多糖通過復合酶（纖維素酶、木瓜蛋白酶和果膠酶）提取，Sevage法脫蛋白，DEAE-纖維素柱和Sephadex G-100柱層析分級純化得到。CN110790846A公開了一種分子量為8~20KDa，由鼠李糖、阿拉伯糖、果糖、甘露糖和半乳糖組成的紫花苜蓿多糖；該紫花苜蓿多糖通過水提浸膏，Sevage法脫蛋白，AB-8樹脂柱脫色，經過DEAE-52纖維素柱和Sephadex G-200柱層析分離得到。但對于低分子量、單糖含量均一的苜蓿多糖及其在調節腸道菌群中的應用還鮮有報道。

發明內容

本發明的目的在于提供一種低分子量苜蓿多糖及其制備方法與調節腸道菌群的應用，通過控制纖維素酶的用量制得低分子量、單糖含量均一的苜蓿多糖，該苜蓿多糖具有調節腸道菌群的作用。

本發明的目的通過以下技術方案實現：一種低分子量苜蓿多糖，分子量為3~6KDa，單糖組成包括0.75~1.16%甘露糖、68.57~81.02%葡萄糖、1.10~4.53%半乳糖。

優選的，所述分子量為5~6 KDa，單糖組成包括0.75%甘露糖、81.02%葡萄糖、1.1%半乳糖。

一種低分子量苜蓿多糖的制備方法，包括如下步驟：

步驟1：將苜蓿原料干燥、粉碎，石油醚回流脫脂，過濾、干燥后得苜蓿干粉。

步驟2：取步驟1所得苜蓿干粉，加入磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液，再加入纖維素酶，提取苜蓿多糖。滅酶活后離心收集上清液，濃縮、醇沉、離心，沉淀經冷凍干燥得粗制苜蓿多糖。

步驟3：將步驟2所得粗制苜蓿多糖加水溶解，加入Sevage試劑，振蕩、離心脫蛋白，濃縮、醇沉、離心，沉淀得脫蛋白粗制苜蓿多糖。

步驟4：將步驟3中的脫蛋白粗制苜蓿多糖用棉絮狀DEAE-52纖維素進行脫色處理，分別用水和NaCl溶液洗脫。將收集的水洗脫液濃縮、醇沉后得到脫色脫蛋白粗制苜蓿多糖。

步驟5：將步驟4所得脫色脫蛋白粗制苜蓿多糖用顆粒狀DEAE-52纖維素分離純化，用水洗脫，合并對稱洗脫峰溶液，濃縮、冷凍干燥得到低分子量苜蓿多糖。

優選的，所述步驟2中苜蓿干粉與磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液的料液比為1：20~30，纖維素酶用量為6~8%。

優選的，所述步驟2中苜蓿干粉與磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液的料液比為1：30，纖維素酶用量為6%。