[發(fā)明專利]一種提高大蒜生長點分化不定芽數(shù)量的組培方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011600067.0
• 申請日: 2020-12-29
• 公開（公告）號: CN112602595A
• 公開（公告）日: 2021-04-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 周志疆;陳雯雯;張楨;楊佩娟;莊錦貴
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇豐收大地種業(yè)發(fā)展有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南京北辰聯(lián)和知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32350
• 代理人: 陸中丹

本發(fā)明公開了一種提高大蒜生長點分化不定芽數(shù)量的組培方法，具體包括以下步驟：S1消毒：將選取的蒜瓣進行預(yù)處理后再依次經(jīng)酒精、氯化汞消毒，剝?nèi)∏o尖頂端0.5?1.0mm組織即獲得外植體，備用；S2培養(yǎng)基配置：配置誘導(dǎo)培養(yǎng)基，待用；S3外植體接種：將所述外植體接入所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，在無菌培養(yǎng)有光照的條件下進行誘導(dǎo)培養(yǎng)，獲得莖尖分生組織苗；S4繼代培養(yǎng)且誘導(dǎo)分化：待不定芽長出新的蒜葉，則進行繼代培養(yǎng)，誘導(dǎo)不定芽分化和生長，最后分化出芽叢。該方法操作簡單，同一種培養(yǎng)基培養(yǎng)和培養(yǎng)條件下，只要不斷剝?nèi)⌒氯~和損傷刺激莖尖分生組織即可；同時繁殖系數(shù)高，一般可達4～5以上；且一步到位誘導(dǎo)出大量的不定芽，時間短，效率高，有效地降低了生產(chǎn)成本。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及植物組培技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種提高大蒜生長點分化不定芽數(shù)量的組培方法。

背景技術(shù)

組培技術(shù)是解決農(nóng)作物脫毒復(fù)壯和快繁苗生產(chǎn)最主要的技術(shù)。

大蒜為百合科蔥屬多年生草本植物，是非常重要的香悻類蔬菜和調(diào)味品，大蒜在生產(chǎn)上采用鱗莖無性繁殖，在長期的無性繁殖過程中，易感染多種病毒，目前發(fā)現(xiàn)的危害大蒜的病毒主要有大蒜花葉病毒、洋蔥黃矮病毒、大蒜潛隱病毒、大蒜褪綠條斑病毒等，田間發(fā)病率有的高達100％，出現(xiàn)鱗莖退化現(xiàn)象嚴重，導(dǎo)致產(chǎn)量下降、品質(zhì)變劣，嚴重影響大蒜生產(chǎn)。通過剝?nèi)∏o尖生長點、根尖、莖盤、花序軸、總苞等未受病毒感染的組織進行培養(yǎng)，培育出脫毒大蒜種苗是目前防治病毒病的最有效途徑。

由于大蒜組織通過脫分化形成愈傷組織，然后再分化建立植株的間接器官發(fā)生途徑存在遺傳變異大，易出現(xiàn)玻璃化苗等情況，很少用于脫毒苗的生產(chǎn)。絕大多數(shù)大蒜脫毒研究都采用由外植體直接再生植株的直接器官發(fā)生途徑。但是這一途徑在大蒜組培過程中出現(xiàn)不定芽誘導(dǎo)低、繁殖系數(shù)低，成本較高的缺陷，很難滿足脫毒苗數(shù)量上的需求。因此如何提高不定芽的誘導(dǎo)率和不定芽的繁殖系數(shù)成為大蒜脫毒苗產(chǎn)業(yè)化的關(guān)鍵。

因此，有必要開發(fā)一種提高大蒜生長點分化不定芽數(shù)量的組培方法，該方法操作簡單、繁殖系數(shù)高且成本低。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種提高大蒜生長點分化不定芽數(shù)量的組培方法，該方法操作簡單、繁殖系數(shù)高且成本低。

為解決以上問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：提高大蒜生長點分化不定芽數(shù)量的組培方法，具體包括以下步驟：

S1消毒：將選取的蒜瓣進行預(yù)處理后再依次經(jīng)酒精、氯化汞消毒備用，準(zhǔn)備剝?nèi)〈笏馇o尖分生組織；

S2培養(yǎng)基配置：配置誘導(dǎo)培養(yǎng)基，待用；

S3取消毒過的蒜瓣在解剖鏡下剝?nèi)∏o尖頂端0.5～1mm的部分即為莖尖分生組織，作為外植體接入所述特定的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，在無菌培養(yǎng)有光照的條件下進行誘導(dǎo)培養(yǎng)，目的是通過直接器官發(fā)生途徑誘導(dǎo)不定芽分化；

S4繼代培養(yǎng)且誘導(dǎo)分化：待莖尖分生組織經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)長出新的蒜葉，蒜葉高度達到10cm時，將新的蒜葉沿莖基部剝除，將假莖1～2cm以上部分剪掉，假莖的兩側(cè)用手術(shù)刀輕輕劃開，刺激分生組織，然后接入分化培養(yǎng)基進行繼代培養(yǎng)；每7～8天重復(fù)繼代培養(yǎng)，4～5次后則能誘導(dǎo)分化出不定芽并生長，最后形成芽叢。

采用上述技術(shù)方案，選取大蒜品種的蒜頭，剝出蒜瓣，在50％多菌靈可濕性粉劑500倍稀釋的溶液中浸泡6～12h，再用自來水沖洗1～3h，后晾干等預(yù)處理，再依次采用75％酒精溶液、和0.1％HgCl溶液進行浸泡消毒。取消毒過的蒜瓣在解剖鏡下剝?nèi)∏o尖頂端0.5-1mm的部分即為莖尖分生組織，并作為外植體接入上述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，誘導(dǎo)培養(yǎng)出新葉，再通過剝?nèi)~損傷和刺激分生組織，誘導(dǎo)出數(shù)量眾多的不定芽的大蒜組織苗培養(yǎng)方法。采用了新的激素配比培養(yǎng)基配方，結(jié)合不斷剝?nèi)⌒氯~和劃傷刺激葉原基四周的分生組織等物理方法，誘導(dǎo)數(shù)量眾多的不定芽形成；普通的莖尖分生組織方法只能分化出1～3株不定芽，通過這一方法可以直接分化出2個芽叢，8～10個不定芽。