[發明專利]一種提高大蒜生長點分化不定芽數量的組培方法

在審

• 申請號: 202011600067.0
• 申請日: 2020-12-29
• 公開（公告）號: CN112602595A
• 公開（公告）日: 2021-04-06
• 發明（設計）人: 周志疆;陳雯雯;張楨;楊佩娟;莊錦貴
• 申請（專利權）人: 江蘇豐收大地種業發展有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 南京北辰聯和知識產權代理有限公司 32350
• 代理人: 陸中丹

1.一種提高大蒜生長點分化不定芽數量的組培方法，其特征在于，具體包括以下步驟：

S1消毒：將選取的蒜瓣進行預處理后再依次經酒精、氯化汞消毒備用，準備剝取大蒜莖尖分生組織；

S2培養基配置：配置誘導培養基，待用；

S3取消毒過的蒜瓣在解剖鏡下剝取莖尖頂端0.5～1mm的部分即為莖尖分生組織，作為外植體接入所述特定的誘導培養基中，在無菌培養有光照的條件下進行誘導培養，目的是通過直接器官發生途徑誘導不定芽分化；

S4繼代培養且誘導分化：待莖尖分生組織經誘導培養長出新的蒜葉，蒜葉高度達到10cm時，將新的蒜葉沿莖基部剝除，將假莖1～2cm以上部分剪掉，假莖的兩側用手術刀輕輕劃開，刺激分生組織，然后接入分化培養基進行繼代培養；每7～8天重復繼代培養，4～5次后則能誘導分化出不定芽并生長，最后形成芽叢。

2.根據權利要求1所述的提高大蒜生長點分化不定芽數量的組培方法，其特征在于，還包括S5芽叢后續培養：待分化出的不定芽數量達到原不定芽數量的4～5倍時，切斷葉片，以2～3個芽點為一叢進行轉接至誘導培養基中進行增殖培養，進入快繁階段；

或將所述步驟S4中獲得芽叢接種入生根培養基進行誘導生根培養，獲得生根苗。上述生根培養基配方將另行申報專利，基礎培養基相同，主要是調整激素和部分營養成分的比例；或接種入微鱗莖培養基中進行微鱗莖的誘導，獲得微鱗莖。誘導微鱗莖培養基也是通過調整激素和營養成分比例而達成；再將生根苗或微鱗莖經過馴化后種植到大田，獲得大蒜苗或大蒜鱗莖。

3.根據權利要求1所述的提高大蒜生長點分化不定芽數量的組培方法，其特征在于，

所述步驟S1具體為：

S11預處理：選取脫毒品種的蒜頭，剝出蒜瓣，在50％多菌靈可濕性粉劑500倍稀釋的溶液中浸泡6～12h，再用自來水沖洗1～3h，后晾干后備用；

S12多菌靈浸泡后蒜瓣的表面消毒：將采用的蒜瓣放入75％酒精浸泡45～70s，然后取出用無菌水沖洗4～5遍，再投入0.1％的升汞(HgCl)消毒溶液內浸泡20～40min，取出后放入無菌水中，同時采用無菌水流水沖洗5～8遍，獲得無菌無毒的蒜瓣。

4.根據權利要求3所述的提高大蒜生長點分化不定芽數量的組培方法，其特征在于，所述步驟S2中培養基的配方為：MS+6BA0.8mg/L+NAA0.2mg/L+3％蔗糖，將配方的原材料按比例稱取混合，加入0.65％瓊脂粉后煮沸再將其pH調到6.0～6.5，并分裝到多個試管中，密封進行高壓滅菌消毒，待冷卻凝固后，待用。

5.根據權利要求4所述的提高大蒜生長點分化不定芽數量的組培方法，其特征在于，所述步驟S3具體為：采用解剖鏡和解剖針將蒜瓣芽的外層葉片組織一層層剝掉，直至解剖針解剖到最小的葉原基，切下莖尖(生長點頂端0.5mm～1.0mm)接種于步驟S2配置的誘導培養基中進行誘導培養。

6.根據權利要求5所述的提高大蒜生長點分化不定芽數量的組培方法，其特征在于，所述步驟S4具體為：

S41：待經誘導培養后的獲得的莖尖分生組織在45～60d后生長出至少10cm高的新葉，獲得大蒜組培苗；

S42：將獲得的大蒜組培苗進行繼代培養，當新葉長到10cm高時，將所述大蒜組培苗轉接一次，先從基部切除大蒜組培苗的新葉，僅保留1～2cm高的假莖即大蒜莖桿，并在假莖的兩側各劃兩刀，刺激莖尖分生組織的分化和生長，采用相同的方法連續轉接4次，第5次將大蒜組培苗的葉片剝除后將假莖縱向一剖為二，作為二塊分生組織接入分化培養基進行繼代培養誘導不定芽；

S43：待10～15d后，則在假莖的基部分化出不定芽，即獲得叢芽，芽的數量為4-5個，在30～35天培養后，叢芽可以進行增殖培養。

7.根據權利要求5所述的提高大蒜生長點分化不定芽數量的組培方法，其特征在于，所述步驟S3采用解剖針進行一層一層解剖時對每解剖一層則對解剖針采用95％酒精和火焰灼燒進行消毒，并待解剖針冷卻后進行解剖操作；所述步驟S3中進行誘導培養的條件為：在25℃的溫度下進行光照時間14～16h/d，光照強度為2000Lux，在培養試管內濕度恒定在95％以上。