[發(fā)明專利]一種腸道內(nèi)菌群鑒定分析方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011596622.7
• 申請(qǐng)日: 2020-12-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112695077A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-04-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 侯明飛;朱月艷;孫子奎
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海派森諾醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/686
• 分類號(hào): C12Q1/686;C12Q1/689;C12Q1/06;C12Q1/14;C12R1/46;C12R1/145;C12R1/01
• 代理公司: 上海點(diǎn)威知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31326
• 代理人: 胡志強(qiáng)

本發(fā)明公開(kāi)了一種腸道內(nèi)菌群鑒定分析方法，1)進(jìn)行干糞便隱血檢測(cè)，2)樣品提取，3)樣品質(zhì)控，4)qPCR擴(kuò)增，將質(zhì)檢合格的DNA樣本稀釋，然后分別構(gòu)建qPCR反應(yīng)體系，然后進(jìn)行擴(kuò)增；5)數(shù)據(jù)分析，滅菌水稀釋DNA原液，進(jìn)行上機(jī)通過(guò)軟件，獲得分析結(jié)果，本發(fā)明可以通過(guò)PCR反應(yīng)獲得多種種腸道細(xì)菌的相對(duì)含量信息，顯著降低時(shí)間成本，體操篩查準(zhǔn)確性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種腸道內(nèi)菌群鑒定分析方法。

背景技術(shù)

近年來(lái)，腸道疾病發(fā)病率不斷攀升，且腸道疾病早期癥狀不明顯，缺乏有效的篩查方法，最終有可能發(fā)展成為癌癥。現(xiàn)有技術(shù)對(duì)腸道疾病的檢查和篩選主要通過(guò)糞便隱血實(shí)驗(yàn)初步篩查高危人群，再進(jìn)行腸鏡檢查。然而糞便隱血實(shí)驗(yàn)缺乏特異性，初篩順應(yīng)性及高危人群的腸鏡受檢率僅30-40％，疾病檢出率19％左右，有待進(jìn)一步提高。利用無(wú)創(chuàng)的標(biāo)志物對(duì)人群進(jìn)行篩查，可縮小腸鏡檢查人數(shù)，進(jìn)一步提高腸鏡的特異性及靈敏度，對(duì)早期篩查腸道疾病有重要的臨床意義。

人的腸道內(nèi)存在大量菌群，有益菌和條件致病菌共存，健康人的體內(nèi)有益菌占優(yōu)勢(shì)，菌群數(shù)量維持平衡的穩(wěn)態(tài)；但患有腸道疾病的人體內(nèi)，體內(nèi)環(huán)境發(fā)生變化，導(dǎo)致菌群失衡，條件致病菌數(shù)量顯著增加，因此，通過(guò)鑒定腸道內(nèi)菌群微生態(tài)可以對(duì)腸道疾病作出預(yù)警。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的提供一種腸道內(nèi)菌群鑒定分析方法。

本發(fā)明的方案是：

一種腸道內(nèi)菌群鑒定分析方法，包括下列步驟：

1)進(jìn)行干糞便隱血檢測(cè)，使用大便隱血檢測(cè)試劑盒通過(guò)膠體金法進(jìn)行檢測(cè)，獲得檢測(cè)結(jié)果；

2)樣品提取，取糞便樣本裝入管中，糞便樣本中加入緩沖液GA，通過(guò)振蕩或吹吸使糞便樣本懸浮，然后加入20～30ul Proteinase K，混勻，加入緩沖液GB，振蕩15s,70℃金屬浴放置25～35min，同時(shí)震蕩1000/min，溶液變清亮后離心，加入無(wú)水乙醇，充分振蕩混勻15s，離心，沉淀絮狀物，將管內(nèi)溶液加入到吸附柱中，離心，吸附柱放入收集管中，然后向吸附柱加入緩沖液GD，離心，移除廢液，漂洗處理，然后放入收集管中，離心，移除廢液，室溫放置3～6min，隨后將吸附柱轉(zhuǎn)入離心管中，箱吸附膜的中間部位懸空滴加洗脫緩沖液TE，65℃放置2～5min,離心2min，將其中溶液收集到離心管中，獲得DNA樣本；

3)樣品質(zhì)控，將步驟2)中所提取的DNA樣本經(jīng)分光光度計(jì)測(cè)試其濃度≥20ng/μl，經(jīng)分光光度計(jì)測(cè)試OD260/OD280值為1.9±0.2，獲得質(zhì)檢合格的DNA樣本；

4)qPCR擴(kuò)增，將質(zhì)檢合格的DNA樣本稀釋，然后分別構(gòu)建qPCR反應(yīng)體系，然后進(jìn)行擴(kuò)增；

5)數(shù)據(jù)分析，通過(guò)軟件，獲得分析結(jié)果。

作為優(yōu)選的技術(shù)方案，所述反應(yīng)體系如下：

作為優(yōu)選的技術(shù)方案，所述反應(yīng)體系如下：

作為優(yōu)選的技術(shù)方案，所述反應(yīng)體系如下：

作為優(yōu)選的技術(shù)方案，所述反應(yīng)體系如下：

作為優(yōu)選的技術(shù)方案，所述反應(yīng)體系如下：

作為優(yōu)選的技術(shù)方案，所述反應(yīng)體系如下：

作為優(yōu)選的技術(shù)方案，所述反應(yīng)體系如下：

作為優(yōu)選的技術(shù)方案，所述反應(yīng)體系如下：