[發明專利]一種腸道內菌群鑒定分析方法

在審

• 申請號: 202011596622.7
• 申請日: 2020-12-30
• 公開（公告）號: CN112695077A
• 公開（公告）日: 2021-04-23
• 發明（設計）人: 侯明飛;朱月艷;孫子奎
• 申請（專利權）人: 上海派森諾醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: C12Q1/686
• 分類號: C12Q1/686;C12Q1/689;C12Q1/06;C12Q1/14;C12R1/46;C12R1/145;C12R1/01
• 代理公司: 上海點威知識產權代理有限公司 31326
• 代理人: 胡志強

1.一種腸道內菌群鑒定分析方法，其特征在于，包括下列步驟：

1)進行干糞便隱血檢測，使用大便隱血檢測試劑盒通過膠體金法進行檢測，獲得檢測結果；

2)樣品提取，取糞便樣本裝入管中，糞便樣本中加入緩沖液GA，通過振蕩或吹吸使糞便樣本懸浮，然后加入20～30ulProteinase K，混勻，加入緩沖液GB，振蕩15s,70℃金屬浴放置25～35min，同時震蕩1000/min，溶液變清亮后離心，加入無水乙醇，充分振蕩混勻15s，離心，沉淀絮狀物，將管內溶液加入到吸附柱中，離心，吸附柱放入收集管中，然后向吸附柱加入緩沖液GD，離心，移除廢液，漂洗處理，然后放入收集管中，離心，移除廢液，室溫放置3～6min，隨后將吸附柱轉入離心管中，箱吸附膜的中間部位懸空滴加洗脫緩沖液TE，65℃放置2～5min,離心2min，將其中溶液收集到離心管中，獲得DNA樣本；

3)樣品質控，將步驟2)中所提取的DNA樣本經分光光度計測試其濃度≥20ng/μl，經分光光度計測試OD260/OD280值為1.9±0.2，獲得質檢合格的DNA樣本；

4)qPCR擴增，將質檢合格的DNA樣本使用滅菌水稀釋到指定濃度，然后分別構建qPCR反應體系，然后進行擴增；

5)數據分析，通過軟件，獲得分析結果。

2.如權利要求1所述的一種腸道內菌群鑒定分析方法，其特征在于，所述反應體系如下：

3.如權利要求1所述的一種腸道內菌群鑒定分析方法，其特征在于，所述反應體系如下：

4.如權利要求1所述的一種腸道內菌群鑒定分析方法，其特征在于，所述反應體系如下：

5.如權利要求1所述的一種腸道內菌群鑒定分析方法，其特征在于，所述反應體系如下：

6.如權利要求1所述的一種腸道內菌群鑒定分析方法，其特征在于，所述反應體系如下：

7.如權利要求1所述的一種腸道內菌群鑒定分析方法，其特征在于，所述反應體系如下：

8.如權利要求1所述的一種腸道內菌群鑒定分析方法，其特征在于，所述反應體系如下：

9.如權利要求1所述的一種腸道內菌群鑒定分析方法，其特征在于，所述反應體系如下：

10.如權利要求1所述的一種腸道內菌群鑒定分析方法，其特征在于，所述擴增反應條件：

循環參數，95℃,30s；95℃,5s至60℃,34s，循環32次；60℃檢測熒光；溶解曲線，95℃，15s；60℃，1min至95℃，0.3℃/sec檢測熒光；

熒光通道檢測選擇，檢測為SYBR通道，根據結果判斷標準判讀結果。