[發明專利]一種液質聯用測定血漿中氟氫可的松濃度的方法

在審

• 申請號: 202011596030.5
• 申請日: 2020-12-29
• 公開（公告）號: CN112763619A
• 公開（公告）日: 2021-05-07
• 發明（設計）人: 范志鴻
• 申請（專利權）人: 徐州立興佳正醫藥科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京淮海知識產權代理事務所(普通合伙) 32205
• 代理人: 李妮

本發明公開了一種液質聯用測定血漿中氟氫可的松濃度的方法，采用液質聯用系統測定，先取待測樣本，加入一定量的混合有機溶劑進行萃取，預處理后，經色譜柱分離，用質譜檢測器檢測。本發明方法快速、準確、靈敏度高、操作簡便，為氟氫可的松的血藥濃度測定提供依據；本方法的血漿標準曲線線性范圍為0.01～3ng/mL，批內和批間精密度RSD均小于±15％，適合于測定血漿中氟氫可的松的濃度。

技術領域

本發明屬于醫藥技術領域，具體涉及一種藥物的測定方法，特別涉及一種液質聯用測定血漿中氟氫可的松濃度的方法。

背景技術

醋酸氟氫可的松用于原發性和繼發性腎上腺皮質功能不足導致的艾迪生病和失鹽型腎上腺皮質綜合癥的部分替代療法。

醋酸氟氫可的松主要為鹽皮質激素作用，雖有一定糖皮質激素的活性，但常用劑量無明顯糖皮質激素作用。其生理作用與氫化可的松類似，但醋酸氟氫可的松對電解質平衡以及對碳水化合物代謝的作用較氫化可的松明顯升高和延長。作為鹽皮質激素，醋酸氟氫可的松可作用于腎臟的遠端小管，以增強鈉離子從管狀流體到血漿中的再吸收；且能夠增加鉀離子和氫離子的尿排泄量。

目前，現有關于氟氫可的松測定方法的速度、精度、靈敏度、選擇性均有待提高。

發明內容

本發明的目的在于提供一種液質聯用測定血漿中氟氫可的松濃度的方法，該方法可提高檢測的靈敏度、精度、選擇性和速度。

為實現上述目的，本發明提供一種液質聯用測定血漿中氟氫可的松濃度的方法，血漿樣本經預處理后經高效液相色譜-串聯質譜檢測其濃度，具體方法包括以下步驟：

(1)血漿樣本預處理：

血漿以K₂EDTA為抗凝劑，以氟氫可的松-d5為內標；于貼有標簽的玻璃試管中精密加入500μL的血漿樣本，加入5μL的體積比為1：1的甲醇水溶液，混勻后加20μL的0.01ng/μL的內標氟氫可的松-d5溶液，混勻后加入20μL1M氫氧化鈉，混勻后再向試管中加入3mL的甲基叔丁基醚，渦旋混合1min，于20℃以3000rpm離心5min，取有機溶液層及標簽轉移至另一干凈試管，于純凈空氣流下，35℃蒸發干燥至少15min至試管完全干燥，于試管中回溶200μL有機溶液，有機溶液為乙腈：水：1M醋酸銨按照體積比30：70：0.1混合得到的混合物，渦旋混勻1min后，將試管中的溶液轉移至96深孔板中，作為測試樣品待檢測；

(2)試樣測定：

取20μL測試樣本注入高效液相色譜-串聯質譜儀中，檢測樣本中氟氫可的松和內標氟氫可的松-d5的色譜峰，并據此計算所述血漿樣本中的氟氫可的松濃度。

液相色譜測定條件為：色譜柱為Agilent Infinity Lab Poroshell 120EC-C18，2.7μm，柱規格為3.0×50mm；色譜柱溫為40℃；流動相A為水：1M醋酸銨按照體積比100：0.1混合得到的混合物；流動相B為乙腈：水：1M醋酸銨按照體積比70：30：0.1混合得到的混合物；洗液為甲醇：水按照體積比50：50混合得到的混合物；自動進樣器溫度為15℃；梯度洗脫，流速為0.6mL/min，進樣量為20μL，分析時間3min；

質譜測定條件為：離子源為電噴霧離子源，噴霧電壓為5500V，霧化溫度為600℃，噴霧氣壓力為90Psi，輔助加熱氣壓力為90Psi，氣簾氣壓力為20Psi，碰撞氣壓力為6Psi，氟氫可的松和內標氟氫可的松-d5的去簇電壓均為100eV；氟氫可的松和內標氟氫可的松-d5的碰撞室入口電壓均為14eV；氟氫可的松和內標氟氫可的松-d5的碰撞電壓均為27eV；氟氫可的松和內標氟氫可的松-d5的碰撞室出口電壓均為10eV；正離子方式檢測；掃描方式為多重反應監測；用于定量分析的離子反應分別為：m/z 381.2→m/z 343.4，其為氟氫可的松；和m/z386.3→m/z 348.3，其為氟氫可的松-d5。

優選的，所述步驟(2)中梯度洗脫的程序為：