[發明專利]一種液質聯用測定血漿中氟氫可的松濃度的方法

在審

• 申請號: 202011596030.5
• 申請日: 2020-12-29
• 公開（公告）號: CN112763619A
• 公開（公告）日: 2021-05-07
• 發明（設計）人: 范志鴻
• 申請（專利權）人: 徐州立興佳正醫藥科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京淮海知識產權代理事務所(普通合伙) 32205
• 代理人: 李妮

1.一種液質聯用測定血漿中氟氫可的松濃度的方法，其特征在于：血漿樣本經預處理后經高效液相色譜-串聯質譜檢測其濃度，具體方法包括以下步驟：

(1)血漿樣本預處理：

血漿以K₂EDTA為抗凝劑，以氟氫可的松-d5為內標；于貼有標簽的玻璃試管中精密加入500μL的血漿樣本，加入5μL的體積比為1：1的甲醇水溶液，混勻后加20μL的0.01ng/μL的內標氟氫可的松-d5溶液，混勻后加入20μL 1M氫氧化鈉，混勻后再向試管中加入3mL的甲基叔丁基醚，渦旋混合1min，于20℃以3000rpm離心5min，取有機溶液層及標簽轉移至另一干凈試管，于純凈空氣流下，35℃蒸發干燥至少15min至試管完全干燥，于試管中回溶200μL有機溶液，有機溶液為乙腈：水：1M醋酸銨按照體積比30：70：0.1混合得到的混合物，渦旋混勻1min后，將試管中的溶液轉移至96深孔板中，作為測試樣品待檢測；

(2)試樣測定：

取20μL測試樣本注入高效液相色譜-串聯質譜儀中，檢測樣本中氟氫可的松和內標氟氫可的松-d5的色譜峰，并據此計算所述血漿樣本中的氟氫可的松濃度；

液相色譜測定條件為：色譜柱為Agilent Infinity Lab Poroshell 120EC-C18，2.7μm，柱規格為3.0×50mm；色譜柱溫為40℃；流動相A為水：1M醋酸銨按照體積比100：0.1混合得到的混合物；流動相B為乙腈：水：1M醋酸銨按照體積比70：30：0.1混合得到的混合物；洗液為甲醇：水按照體積比50：50混合得到的混合物；自動進樣器溫度為15℃；梯度洗脫，流速為0.6mL/min，進樣量為20μL，分析時間3min；

質譜測定條件為：離子源為電噴霧離子源，噴霧電壓為5500V，霧化溫度為600℃，噴霧氣壓力為90Psi，輔助加熱氣壓力為90Psi，氣簾氣壓力為20Psi，碰撞氣壓力為6Psi，氟氫可的松和內標氟氫可的松-d5的去簇電壓均為100eV；氟氫可的松和內標氟氫可的松-d5的碰撞室入口電壓均為14eV；氟氫可的松和內標氟氫可的松-d5的碰撞電壓均為27eV；氟氫可的松和內標氟氫可的松-d5的碰撞室出口電壓均為10eV；正離子方式檢測；掃描方式為多重反應監測；用于定量分析的離子反應分別為：m/z 381.2→m/z 343.4，其為氟氫可的松；和m/z386.3→m/z 348.3，其為氟氫可的松-d5。

2.根據權利要求1所述的一種液質聯用測定血漿中氟氫可的松濃度的方法，其特征在于：所述步驟(2)中梯度洗脫的程序為：

3.根據權利要求1或2所述的一種液質聯用測定血漿中氟氫可的松濃度的方法，其特征在于：所述步驟(2)中，采用內標法，以氟氫可的松和內標氟氫可的松-d5的峰面積比值帶入標準曲線方程計算所述血漿樣本中的氟氫可的松的濃度。