[發(fā)明專利]一種液質(zhì)聯(lián)用測定血漿中氟氫可的松濃度的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202011596030.5
• 申請日: 2020-12-29
• 公開（公告）號: CN112763619A
• 公開（公告）日: 2021-05-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 范志鴻
• 申請（專利權(quán)）人: 徐州立興佳正醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京淮海知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 32205
• 代理人: 李妮

1.一種液質(zhì)聯(lián)用測定血漿中氟氫可的松濃度的方法，其特征在于：血漿樣本經(jīng)預(yù)處理后經(jīng)高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測其濃度，具體方法包括以下步驟：

(1)血漿樣本預(yù)處理：

血漿以K₂EDTA為抗凝劑，以氟氫可的松-d5為內(nèi)標(biāo)；于貼有標(biāo)簽的玻璃試管中精密加入500μL的血漿樣本，加入5μL的體積比為1：1的甲醇水溶液，混勻后加20μL的0.01ng/μL的內(nèi)標(biāo)氟氫可的松-d5溶液，混勻后加入20μL 1M氫氧化鈉，混勻后再向試管中加入3mL的甲基叔丁基醚，渦旋混合1min，于20℃以3000rpm離心5min，取有機(jī)溶液層及標(biāo)簽轉(zhuǎn)移至另一干凈試管，于純凈空氣流下，35℃蒸發(fā)干燥至少15min至試管完全干燥，于試管中回溶200μL有機(jī)溶液，有機(jī)溶液為乙腈：水：1M醋酸銨按照體積比30：70：0.1混合得到的混合物，渦旋混勻1min后，將試管中的溶液轉(zhuǎn)移至96深孔板中，作為測試樣品待檢測；

(2)試樣測定：

取20μL測試樣本注入高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀中，檢測樣本中氟氫可的松和內(nèi)標(biāo)氟氫可的松-d5的色譜峰，并據(jù)此計(jì)算所述血漿樣本中的氟氫可的松濃度；

液相色譜測定條件為：色譜柱為Agilent Infinity Lab Poroshell 120EC-C18，2.7μm，柱規(guī)格為3.0×50mm；色譜柱溫為40℃；流動(dòng)相A為水：1M醋酸銨按照體積比100：0.1混合得到的混合物；流動(dòng)相B為乙腈：水：1M醋酸銨按照體積比70：30：0.1混合得到的混合物；洗液為甲醇：水按照體積比50：50混合得到的混合物；自動(dòng)進(jìn)樣器溫度為15℃；梯度洗脫，流速為0.6mL/min，進(jìn)樣量為20μL，分析時(shí)間3min；

質(zhì)譜測定條件為：離子源為電噴霧離子源，噴霧電壓為5500V，霧化溫度為600℃，噴霧氣壓力為90Psi，輔助加熱氣壓力為90Psi，氣簾氣壓力為20Psi，碰撞氣壓力為6Psi，氟氫可的松和內(nèi)標(biāo)氟氫可的松-d5的去簇電壓均為100eV；氟氫可的松和內(nèi)標(biāo)氟氫可的松-d5的碰撞室入口電壓均為14eV；氟氫可的松和內(nèi)標(biāo)氟氫可的松-d5的碰撞電壓均為27eV；氟氫可的松和內(nèi)標(biāo)氟氫可的松-d5的碰撞室出口電壓均為10eV；正離子方式檢測；掃描方式為多重反應(yīng)監(jiān)測；用于定量分析的離子反應(yīng)分別為：m/z 381.2→m/z 343.4，其為氟氫可的松；和m/z386.3→m/z 348.3，其為氟氫可的松-d5。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種液質(zhì)聯(lián)用測定血漿中氟氫可的松濃度的方法，其特征在于：所述步驟(2)中梯度洗脫的程序?yàn)椋?/p>

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種液質(zhì)聯(lián)用測定血漿中氟氫可的松濃度的方法，其特征在于：所述步驟(2)中，采用內(nèi)標(biāo)法，以氟氫可的松和內(nèi)標(biāo)氟氫可的松-d5的峰面積比值帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算所述血漿樣本中的氟氫可的松的濃度。