[發(fā)明專利]一種杜仲補天素丸的HPLC指紋圖譜的建立方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011595512.9
• 申請日: 2020-12-29
• 公開（公告）號: CN112782308B
• 公開（公告）日: 2022-08-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 曹國瓊;張永萍;繆艷燕;徐劍;劉耀;程純
• 申請（專利權(quán)）人: 貴州中醫(yī)藥大學(xué)
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京聯(lián)創(chuàng)佳為專利事務(wù)所(普通合伙) 11362
• 代理人: 張梅

本發(fā)明公開了一種杜仲補天素丸的HPLC指紋圖譜的建立方法的制作工藝。本發(fā)明步驟包括：(1)對照品溶液的制備；(2)供試品溶液的制備；(3)指紋圖譜的制作；(4)標準指紋譜圖的確認：按照上述提供的方法，對多批次杜仲補天素丸建立了HPLC指紋圖譜，通過分析比較確定了22個共有峰，這些共有峰構(gòu)成了杜仲補天素丸的指紋特征，作為杜仲補天素丸的標準指紋圖譜。本發(fā)明方法具有快速、簡便、穩(wěn)定、精密度高、穩(wěn)定性好、重復(fù)性好等優(yōu)點；用該方法還能全面地反映杜仲補天素丸中所含化學(xué)成分的種類與數(shù)量，并可直接找到?jīng)]食子酸、綠原酸、甘草苷、金絲桃苷、毛蕊花糖苷、淫羊藿苷及丹皮酚的峰，可以為杜仲補天素丸、質(zhì)量控制提供方法學(xué)參考。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及藥品分析技術(shù)領(lǐng)域，特別是一種杜仲補天素丸的HPLC指紋圖譜的建立方法。

背景技術(shù)

杜仲補天素系列制劑由鹽杜仲、制菟絲子、肉蓯蓉、淫羊藿、牡丹皮等25味中藥組成，具有溫腎養(yǎng)心，壯腰安神的功效，臨床主要用于腰脊酸軟，夜多小便，神經(jīng)衰弱等癥。根據(jù)國家藥品監(jiān)督管理局最新數(shù)據(jù)，杜仲補天素制劑包括杜仲補天素膠囊、杜仲補天素片及杜仲補天素丸，這3種劑型雖然處方相同，但生產(chǎn)工藝有差異，所以含的物質(zhì)基礎(chǔ)可能有較大的區(qū)別。杜仲補天素系列制劑是中藥復(fù)方制劑，含多種中藥，化學(xué)成分復(fù)雜，對其進行有效的質(zhì)量控制是保證其臨床療效的重要基礎(chǔ)。關(guān)于杜仲補天素丸質(zhì)量控制報道僅有芍藥苷的含量測定和部分藥材的定性鑒別，缺乏對杜仲補天素丸更為綜合、全面的質(zhì)量控制方式研究。研究杜仲補天素丸劑質(zhì)量標準，對其臨床應(yīng)用具有重要意義。

隨著中藥指紋圖譜技術(shù)的發(fā)展和廣泛應(yīng)用，特征圖譜及多成分檢測能提供豐富的指標成分或藥效成分信息，較全面地反映藥材和制劑的質(zhì)量，近年來已廣泛應(yīng)用在于中藥材和中成藥的質(zhì)量控制中。目前對杜仲補天素制劑的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究十分薄弱，其藥效成分還不明確。杜仲補天素丸含25種中藥，山茱萸中沒食子酸具有抗氧化、抗炎以及對心腦血管保護的藥理作用，它同時也是地榆、拳參等藥材的主要有效成分；菟絲子含金絲桃苷能增強機體免疫功能，對神經(jīng)系統(tǒng)有保護作用，其主要是對神經(jīng)細胞的保護，所以對于神經(jīng)衰弱有一定治療作用；肉蓯蓉中主要有效成分毛蕊花糖苷具有增強免疫調(diào)節(jié)功能、保護神經(jīng)系統(tǒng)以及補腎壯陽的藥理作用。淫羊藿苷是淫羊藿中黃酮類成分，也是抗骨質(zhì)疏松重要藥效物質(zhì)；丹皮酚是牡丹皮的代表性成分，其具有鎮(zhèn)靜催眠、保護神經(jīng)及抗炎鎮(zhèn)痛的藥理作用，結(jié)合杜仲補天素丸治療病癥，可以將以上幾種成分作為杜仲補天素丸的有效成分。

目前，尚無杜仲補天素丸HPLC指紋圖譜研究工作的報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于，提供一種杜仲補天素丸的HPLC指紋圖譜的建立方法的制作工藝。本發(fā)明方法具有快速、簡便、穩(wěn)定、精密度高、穩(wěn)定性好、重復(fù)性好等優(yōu)點；用該方法還能全面地反映杜仲補天素丸中所含化學(xué)成分的種類與數(shù)量，并可直接找到?jīng)]食子酸、綠原酸、甘草苷、金絲桃苷、毛蕊花糖苷、淫羊藿苷及丹皮酚的峰，可以為杜仲補天素丸、質(zhì)量控制提供方法學(xué)參考。

本發(fā)明的技術(shù)方案：一種杜仲補天素丸的HPLC指紋圖譜的建立方法的制作工藝，包括以下步驟：

(1)對照品溶液的制備：分別稱取沒食子酸對照品、綠原酸對照品、甘草苷對照品、金絲桃苷對照品、毛蕊花糖苷對照品、淫羊藿苷對照品、丹皮酚對照品分別用甲醇定容；分別取沒食子酸對照品溶液、綠原酸對照品溶液、甘草苷對照品溶液、金絲桃苷對照品溶液、毛蕊花糖苷對照品溶液、淫羊藿苷對照品溶液、丹皮酚對照品溶液，即得對照品溶液；

(2)供試品溶液的制備：取杜仲補天素丸，粉碎，加甲醇溶解，超聲提取，待冷卻后補重，離心，取上清液后用微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液；

(3)指紋圖譜的制作：色譜條件：色譜柱：PntulipsBP-C18Plus色譜柱，5μm，4.6×250mm；流動相：0.2％磷酸水為A相，乙腈為B相；梯度洗脫，流速為1.0mL/min；檢測波長為330nm；柱溫為35℃；進樣量為10μL；記錄色譜圖得到杜仲補天素丸的HPLC指紋圖譜；