[發明專利]一種杜仲補天素丸的HPLC指紋圖譜的建立方法

有效

• 申請號: 202011595512.9
• 申請日: 2020-12-29
• 公開（公告）號: CN112782308B
• 公開（公告）日: 2022-08-16
• 發明（設計）人: 曹國瓊;張永萍;繆艷燕;徐劍;劉耀;程純
• 申請（專利權）人: 貴州中醫藥大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京聯創佳為專利事務所(普通合伙) 11362
• 代理人: 張梅

1.一種杜仲補天素丸的HPLC指紋圖譜的建立方法，其特征在于：包括以下步驟：

（1）對照品溶液的制備：分別稱取沒食子酸對照品、綠原酸對照品、甘草苷對照品、金絲桃苷對照品、毛蕊花糖苷對照品、淫羊藿苷對照品、丹皮酚對照品分別用甲醇定容；分別取沒食子酸對照品溶液、綠原酸對照品溶液、甘草苷對照品溶液、金絲桃苷對照品溶液、毛蕊花糖苷對照品溶液、淫羊藿苷對照品溶液、丹皮酚對照品溶液，即得對照品溶液；

（2）供試品溶液的制備：取杜仲補天素丸，粉碎，加甲醇溶解，超聲提取，待冷卻后補重，離心，取上清液后用微孔濾膜濾過，取續濾液，即得供試品溶液；

（3）指紋圖譜的制作：色譜條件：色譜柱：PntulipsBP-C18Plus色譜柱，5μm，4.6×250mm；流動相：0.2%磷酸水為A相，乙腈為B相；梯度洗脫，流速為1.0mL/min；檢測波長為330nm；柱溫為35℃；進樣量為10μL；記錄色譜圖得到杜仲補天素丸的HPLC指紋圖譜；所述梯度洗脫的程序是0～30min，95%→83%A；30～33min，83%→83%A；33～43min，83%→79%A；43～53min，79%→79%A；53～65min，79%→72%A；65～75min，72%→72%A；75～77min，72%→69%A；77～98min，69%→58%A；98～138min，58%→21%A；

（4）標準指紋譜圖的確認：按照提供的上述方法，對多批次杜仲補天素丸建立了HPLC指紋圖譜，通過分析比較確定了22個共有峰，這些共有峰構成了杜仲補天素丸的指紋特征，作為杜仲補天素丸的標準指紋圖譜。

2.根據權利要求1所述的杜仲補天素丸的HPLC指紋圖譜的建立方法，其特征在于：所述步驟（1）是精密稱取沒食子酸對照品9.28mg放置于5mL量瓶、綠原酸對照品2.71mg放置于10mL量瓶、甘草苷對照品5.15mg放置于10mL量瓶、金絲桃苷對照品4.56mg放置于10mL量瓶、毛蕊花糖苷對照品4.48mg放置于10mL量瓶、淫羊藿苷對照品0.00218mg放置于1mL量瓶、丹皮酚對照品6.95mg放置于5mL量瓶用甲醇溶解并定容；分別取沒食子酸對照品溶液0.51mL、綠原酸對照品溶液0.05mL、甘草苷對照品溶液0.14mL、金絲桃苷對照品溶液0.05mL、毛蕊花糖苷對照品溶液0.1mL、淫羊藿苷對照品溶液0.08mL、丹皮酚對照品溶液0.07mL置于1mL量瓶中，即得對照品溶液。

3.根據權利要求1所述的杜仲補天素丸的HPLC指紋圖譜的建立方法，其特征在于：所述步驟（2）是取杜仲補天素丸適量，粉碎，精密稱定4g，加25mL甲醇溶解，超聲提取60min，待冷卻后補重，離心15min，取上清液后用0.22μm微孔濾膜濾過，取續濾液，即得供試品溶液。

4.根據權利要求1所述的杜仲補天素丸的HPLC指紋圖譜的建立方法，其特征在于：所述22個共有峰中，以15號峰丹皮酚為參照峰，則1號峰為沒食子酸，3號峰為綠原酸，6號峰為甘草苷，7號峰為金絲桃苷，8號峰為毛蕊花糖苷，14號峰為淫羊藿苷，15號峰為丹皮酚。