[發明專利]一種用于快速檢測鴨2型腺病毒和鴨圓環病毒的雙重PCR引物組及其檢測方法與應用

在審

• 申請號: 202011594770.5
• 申請日: 2020-12-29
• 公開（公告）號: CN112575122A
• 公開（公告）日: 2021-03-30
• 發明（設計）人: 姬普雨;王新港;晉盈輝;李新;姬星宇;張先峰;周欣;李厚偉;丁麗萍
• 申請（專利權）人: 商丘美蘭生物工程有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 鄭州大通專利商標代理有限公司 41111
• 代理人: 許艷敏

本發明公開了一種用于快速檢測鴨2型腺病毒和鴨圓環病毒的雙重PCR引物組及其檢測方法與應用，所述的多重PCR引物組是由用于檢測DAdV?2的引物和用于檢測DuCV的引物組成。采用雙重PCR引物組快速檢測DAdV?2和DuCV的雙重PCR方法，實現了在同一個反應體系中同時擴增兩種病毒，減少了操作次數，極大的避免了交叉污染。該方法對DAdV?2和DuCV的檢測與鑒別、疫病監測及流行病學調查等方面具有重要的應用價值。

技術領域

本發明屬于禽類病毒檢測技術領域。具體涉及一種用于快速檢測鴨2型腺病毒和鴨圓環病毒的雙重PCR引物組及其檢測方法與應用。

背景技術

鴨2型腺病毒(Duck adenovirus 2，DAdV-2)屬腺病毒科禽腺病毒屬，為線狀雙鏈DNA病毒。該病主要發生在20～30日齡鴨，患病鴨主要表現為精神萎靡、沉郁和消瘦，排淺黃白色的糞便。病理變化為肝臟腫大并有白色針尖狀壞死點灶，腎臟及脾臟腫大充血，胰腺有白色點狀壞死。該病1977年首次在法國的番鴨中流行，2014年奧地利科學家Ana Marek通過高通量測序技術獲得該病毒全序列。2015年由陳峰等應用宏基因組學分離、鑒定出國內首株鴨2型腺病毒。目前該病已廣泛流行于廣東、福建、浙江等水禽養殖密集地區，給養鴨業造成了巨大的經濟損失。

鴨圓環病毒(Duckcircovirus，DuCV)是圓環病毒科圓環病毒屬新成員，DuCV常呈潛伏感染，并入侵鴨的免疫系統，導致鴨機體的免疫功能下降，對多種條件性病原抵抗性減弱，使其更易遭受其他致病因素的侵襲。而一旦發生混合感染(如鴨流感病毒、鴨腺病毒、鴨大腸桿菌等)，感染鴨機體的死亡率就會大大提升。同時，DuCV還會導致鴨子羽毛凌亂、生長遲緩、體重減輕等癥狀，所以圓環病毒作為一種重要的病原微生物，對我國養殖業的危害不容忽視。

上述兩種病原均為DNA病毒，臨床引起癥狀具有一定的相似性，易發生混合感染，極大的增加臨鑒別診斷的難度。而常規的診斷方法，如動物實驗、免疫學和病毒分離培養，在臨床診斷中存在診斷時間長、敏感性低以及操作繁瑣等缺點，在臨床中不易于快速診斷上述兩種疾病。因此，急需建立一種快速、準確、靈敏的檢測方法來診斷和監控上述兩種病原，確保養鴨業的健康發展。

PCR是實驗室常用檢測方法之一，其具有快速、靈敏、成本低、操作簡單等優點；該方法不僅能進行快速確定病毒種類，還能檢測病毒的早期感染和潛伏感染。但是檢測時如果使用擴增單種病毒的引物對待測樣品進行鑒別，則可能需要準備多份樣品擴增多次才能確定感染的病毒類型，不僅在實際操作中需要增加檢測次數，另外還會引起交叉感染。雙重PCR是在單一PCR基礎上建立起來，其優點在于通過一次PCR的反應，可以同時檢測并鑒別兩種病原，在臨床中具有重要的應用價值。目前國內外尚未報道可同時檢測鴨圓環病毒和鴨2型腺病毒的雙重PCR檢測方法。

發明內容

針對上述問題，本發明提供了一種用于快速檢測鴨2型腺病毒和鴨圓環病毒的雙重PCR引物組及其檢測方法與應用。該引物組解決了單一PCR操作繁瑣、交叉污染風險高的問題，能夠對鴨群中鴨圓環病毒和鴨2型腺病毒進行鑒別診斷，對鴨群中鴨圓環病毒和鴨2型腺病毒流行病學調查及防控提供了可靠的檢測手段，具有重要的臨床應用價值。

本發明是通過以下技術方案實現的

一種用于快速檢測DAdV-2和DuCV的雙重PCR引物組，所述的雙重PCR引物組由用于檢測DAdV-2的引物和用于檢測DuCV的引物組成，

用于檢測DAdV-2的引物的核苷酸序列為：

上游引物F1：5’-CGATGGAACGACAGTAAA-3’

下游引物R1：5’-AAACGAAAAAGCAAGAGC-3’

用于檢測DuCV的引物的核苷酸序列為：

上游引物F2：5’-GTGGTGGGACGGTTACTCGG-3’