[發明專利]一種用于快速檢測鴨2型腺病毒和鴨圓環病毒的雙重PCR引物組及其檢測方法與應用

在審

• 申請號: 202011594770.5
• 申請日: 2020-12-29
• 公開（公告）號: CN112575122A
• 公開（公告）日: 2021-03-30
• 發明（設計）人: 姬普雨;王新港;晉盈輝;李新;姬星宇;張先峰;周欣;李厚偉;丁麗萍
• 申請（專利權）人: 商丘美蘭生物工程有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 鄭州大通專利商標代理有限公司 41111
• 代理人: 許艷敏

1.一種用于快速檢測DAdV-2和DuCV的雙重PCR引物組，其特征在于，所述的雙重PCR引物組由用于檢測DAdV-2的引物和用于檢測DuCV的引物組成，

用于檢測DAdV-2的引物的核苷酸序列為：

上游引物F1：5’-CGATGGAACGACAGTAAA-3’

下游引物R1：5’-AAACGAAAAAGCAAGAGC-3’

用于檢測DuCV的引物的核苷酸序列為：

上游引物F2：5’-GTGGTGGGACGGTTACTCGG-3’

下游引物R2：5’-TTTATTGGGAACGGGAGGGT-3’。

2.權利要求1所述的引物組在制備檢測DAdV-2和DuCV的試劑中的應用。

3.一種含有權利要求1所述的雙重PCR引物組的試劑盒。

4.采用權利要求1所述的雙重PCR引物組同時檢測DAdV-2和DuCV的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

(1)合成用于檢測DAdV-2和DuCV的雙重PCR引物組；

(2)提取待檢測樣品的總DNA，以提取的總DNA為模板，采用步驟(1)合成的雙重PCR引物組進行PCR擴增反應；

(3)分析PCR擴增產物，進行結果判定。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟(2)中所述PCR擴增的反應體系為：上游引物F1、下游引物R1以及上游引物F2、下游引物R2各0.5μL，各引物的終濃度為0.4pmol/μL；2×Taq Master Mix酶12.5μL；DNA模板各1μL；滅菌后ddH₂O補足至25μL；所述PCR擴增反應的條件為：95℃預變性5min；94℃90s，94℃20s，54℃30s，72℃20s，30個循環，最后一個循環72℃延伸5min。

6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，步驟(3)所述分析PCR擴增產物具體為對PCR擴增產物進行瓊脂糖凝膠電泳分析，根據電泳結果確定樣品中病毒的種類；樣品中有DAdV-2時，擴增產物中會出現598bp的條帶；樣品中有DuCV時，擴增產物中會出現297bp的條帶；樣品中含有DAdV-2和DuCV混合感染時，擴增產物中會出現598bp和297bp兩條條帶。