[發(fā)明專利]EP402R、CP204L和E183L共表達(dá)重組腺病毒及構(gòu)建和應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011592585.2
• 申請日: 2020-12-29
• 公開（公告）號: CN112522286A
• 公開（公告）日: 2021-03-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 黃明生;張泉;朱立麒;殷俊
• 申請（專利權(quán)）人: 揚州大學(xué)
• 主分類號: C12N15/34
• 分類號: C12N15/34;C12N15/62;C12N15/861;C12N15/66;C12N5/10
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 薛紅凡

1.一種EP402R、CP204L和E183L共表達(dá)的基因，所述基因是將EGFP基因、第一連接基因、EP402R基因、第二連接基因、CP204L基因、第二連接基因和E183L基因順次串聯(lián)得到；所述EP402R基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；所述CP204L基因的核苷酸序列如SEQ IDNO：2所示；所述E183L基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；所述第一連接基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：11所示；所述第二連接基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：12所示。

2.一種含有權(quán)利要求1所述基因的重組載體，所述重組載體以pShuttle-CMV載體為原始載體；所述基因的插入位點為KpnI和HindIII之間。

3.一種重組腺病毒載體，插入有權(quán)利要求2所述重組載體，插入位點為PmeI酶切位點序列的第一位點和第二位點之間；所述第一位點的核苷酸序列如SEQ ID NO：13所示；所述第二位點的核苷酸序列如SEQ ID NO：14所示。

4.權(quán)利要求3所述重組腺病毒載體的構(gòu)建方法，包括以下步驟：

使用限制性內(nèi)切酶PmeI對權(quán)利要求2所述重組載體進(jìn)行酶切，得到線性化質(zhì)粒，將所述線性化質(zhì)粒轉(zhuǎn)化入含pAdEasy-1質(zhì)粒的大腸桿菌中，經(jīng)過重組獲得重組腺病毒載體。

5.一種包含權(quán)利要求3所述重組腺病毒載體或者權(quán)利要求4所述構(gòu)建方法得到重組腺病毒載體的重組腺病毒。

6.權(quán)利要求5所述重組腺病毒的構(gòu)建方法，包括以下步驟：將所述重組腺病毒載體經(jīng)過PacI酶切線性化，得到線性化質(zhì)粒，采用所述線性化質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HEK293A細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，獲得重組腺病毒。

7.權(quán)利要求5所述重組腺病毒或權(quán)利要求6所述構(gòu)建方法得到的重組腺病毒在制備非洲豬瘟疫苗中的應(yīng)用。

8.一種非洲豬瘟疫苗，包括免疫佐劑和免疫原，其特征在于，所述免疫原為權(quán)利要求5所述重組腺病毒或權(quán)利要求6所述構(gòu)建方法得到的重組腺病毒。