[發(fā)明專利]一種負載外泌體的口服結(jié)腸靶向給藥的聚合物的制備方法

有效

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• 申請日: 2020-12-29
• 公開（公告）號: CN112618515B
• 公開（公告）日: 2021-09-24
• 發(fā)明（設計）人: 胡祎煒;康明珠;李夢雨;段亦都;潘子豪;張夏鼎;鄧超;陳敬華
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: A61K9/51
• 分類號: A61K9/51;A61K35/28;A61K47/36;C08B37/00;C08B37/08;A61P1/00;A61P29/00
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產(chǎn)權代理有限公司 23211
• 代理人: 林娟

本發(fā)明公開了一種負載外泌體的口服結(jié)腸靶向給藥的聚合物的制備方法，屬于生物醫(yī)藥領域。本發(fā)明提供的這種負載外泌體用于口服結(jié)腸靶向給藥的層層自組裝聚合物是由殼聚糖季銨鹽(HTCC)、氧化魔芋葡甘聚糖(OKGM)以及間充質(zhì)干細胞來源的外泌體(MSCs?EXO)通過層層包裹和逐層封裝(LbL)復合而成的(MSCs?EXO)?(HTCC/OKGM)_n自組裝聚合物，具有較好的生物相容性、穩(wěn)定性、安全性、抗炎性及緩釋性能；可作為載藥系統(tǒng)搭載外泌體對潰瘍部分進行修復。

技術領域

本發(fā)明涉及一種負載外泌體的口服結(jié)腸靶向給藥的聚合物的制備方法，屬于生物醫(yī)藥領域。

背景技術

瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)是一種慢性非特異性腸道炎癥性疾病，病變主要累及乙狀結(jié)腸、直腸的黏膜和黏膜下層，也可延伸至降結(jié)腸，甚至整個結(jié)腸。臨床表現(xiàn)主要為腹瀉﹑黏液膿血便腹痛等癥狀。瘍性結(jié)腸炎可發(fā)病常在青春晚期和成年早期，平均年齡為17～40歲。由于瘍性結(jié)腸炎的病因尚不不清，病情也易反復發(fā)作，病程漫長，遷延不愈，且具有癌變傾向并伴隨多種腸外癥狀，因此，WHO將其確定為現(xiàn)代難治愈的疾病之一。

目前瘍性結(jié)腸炎的手術治療目前尚無規(guī)范化的標準術式。中醫(yī)上的藥物治療常常采取保留灌腸給藥的方式，西藥主要選擇氨基水楊酸類、腎上腺皮質(zhì)激素類、免疫抑制劑類等藥物進行治療。現(xiàn)有的治療瘍性結(jié)腸炎的傳統(tǒng)藥物往往面臨藥效持續(xù)時間短、抗炎作用不持久的問題，還容易存在病情易復發(fā)、靶向性較差且容易導致一些不良反應等一系列問題。

因此，開發(fā)出一種具有較高安全性、穩(wěn)定性和持久抗炎性較強靶向性的負載外泌體的口服結(jié)腸靶向給藥的聚合物，對于治療潰瘍性結(jié)腸炎而言具有良好的市場前景。

發(fā)明內(nèi)容

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了一種負載外泌體的口服結(jié)腸靶向給藥的聚合物的制備方法，由殼聚糖季銨鹽和氧化魔芋葡甘聚糖作為外殼，通過層層自組裝的方式將負載外泌體的口服結(jié)腸靶向給藥進行包覆，獲得了一種安全性高、穩(wěn)定性好、具有持久抗炎性、靶向性較強的可用于治療潰瘍性結(jié)腸炎的負載外泌體的口服結(jié)腸靶向給藥層層自組裝聚合物系統(tǒng)。

本發(fā)明首先提供了一種負載外泌體的口服結(jié)腸靶向給藥的聚合物的制備方法，所述方法步驟包括：

(1)收集間充質(zhì)干細胞培養(yǎng)上清液，通過差速離心法提取外泌體；

(2)在魔芋葡甘聚糖水溶液中加入氧化劑高碘酸鹽后攪拌反應，之后加入乙二醇、透析，固液分離取上清液，冷凍干燥制備得到氧化魔芋葡甘聚糖；

(3)將步驟(2)制備得到的氧化魔芋葡甘聚糖和殼聚糖季銨鹽分別溶解于PBS緩沖液中得到氧化魔芋葡甘聚糖溶液和殼聚糖季銨鹽溶液；

(4)將殼聚糖季銨鹽溶液與外泌體恒定旋轉(zhuǎn)20-30分鐘，用PBS洗滌，離心，收集沉淀，得到(MSCs-EXO)-HTCC聚合物；

(5)將步驟(4)得到的(MSCs-EXO)-HTCC聚合物與氧化魔芋葡甘聚糖溶液恒定旋轉(zhuǎn)20-30分鐘，用PBS洗滌，離心，得到(MSCs-EXO)-(HTCC/OKGM)聚合物；

重復步驟(4)和(5)，即可制備得到負載干細胞用于口服結(jié)腸靶向給藥的層層自組裝聚合物，(MSCs-EXO)-(HTCC/OKGM)_n聚合物，n為包裹層數(shù)。

進一步的，所述步驟(1)中收集的間充質(zhì)干細胞上清液為第三代間充質(zhì)干細胞融合至70-80％時，更換無血清培養(yǎng)基，培養(yǎng)48h收集的細胞上清液。