[發明專利]一種負載外泌體的口服結腸靶向給藥的聚合物的制備方法

有效

• 申請號: 202011589485.4
• 申請日: 2020-12-29
• 公開（公告）號: CN112618515B
• 公開（公告）日: 2021-09-24
• 發明（設計）人: 胡祎煒;康明珠;李夢雨;段亦都;潘子豪;張夏鼎;鄧超;陳敬華
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: A61K9/51
• 分類號: A61K9/51;A61K35/28;A61K47/36;C08B37/00;C08B37/08;A61P1/00;A61P29/00
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 林娟

1.一種負載外泌體的口服結腸靶向給藥的聚合物的制備方法，其特征在于，所述方法步驟包括：

（1）收集間充質干細胞培養上清液，通過差速離心法提取外泌體；

（2）在魔芋葡甘聚糖水溶液中加入氧化劑高碘酸鹽后攪拌反應，之后加入乙二醇、透析，固液分離取上清液，冷凍干燥制備得到氧化魔芋葡甘聚糖；

（3）將步驟（2）制備得到的氧化魔芋葡甘聚糖和殼聚糖季銨鹽分別溶解于PBS緩沖液中得到氧化魔芋葡甘聚糖溶液和殼聚糖季銨鹽溶液，所述殼聚糖季銨鹽在PBS中溶解的終濃度為0.01-1.0 mg/mL；

（4）將殼聚糖季銨鹽溶液與外泌體恒定旋轉20-30分鐘，用PBS洗滌，離心，收集沉淀，得到(MSCs-EXO)-HTCC聚合物；

（5）將步驟（4）得到的(MSCs-EXO)-HTCC聚合物與氧化魔芋葡甘聚糖溶液恒定旋轉20-30分鐘，用PBS洗滌，離心，得到(MSCs-EXO)-(HTCC/OKGM)聚合物；

重復步驟（4）和（5）2~3次，即可制備得到負載干細胞用于口服結腸靶向給藥的層層自組裝聚合物，(MSCs-EXO)-(HTCC/OKGM) _n聚合物，n為包裹層數。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述氧化魔芋葡甘聚糖的制備具體包括：在500mL去離子水中加入5gKGM粉末，攪拌溶解，滴加10mL0.5mol/L高碘酸鈉水溶液，40℃避光攪拌4h；之后向反應混合物中加入10mL乙二醇攪拌2h，以中和未反應的高碘酸鹽；將溶液用透析膜透析3天，直到滲析液中不含碘酸鹽；將反應產物以2500r/min離心20min，取上清液，真空冷凍干燥獲得OKGM，將干燥的樣品儲存在干燥器中以供下一步使用。

3.根據權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，所述步驟（3）中氧化魔芋葡甘聚糖在PBS中溶解的終濃度為0.01-1.0mg/mL。

4.根據權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，所述步驟（4）和（5）中，PBS為磷酸緩沖鹽溶液，pH為7.2-7.4，洗滌2~3次。

5.根據權利要求1或2所述的制備方法，其特征在于，所述外泌體與殼聚糖季銨鹽溶液的質量體積比為200-500μg：1-3mL。

6.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述外泌體與殼聚糖季銨鹽溶液的質量體積比為200-500μg：1-3mL。

7.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述外泌體與殼聚糖季銨鹽溶液的質量體積比為200-500μg：1-3mL。

8.根據權利要求1、2或6~7任一項所述的制備方法，其特征在于，所述氧化魔芋葡甘聚糖溶液與殼聚糖季銨鹽溶液的體積比為l-3：1-3。

9.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述氧化魔芋葡甘聚糖溶液與殼聚糖季銨鹽溶液的體積比為l-3：1-3。

10.根據權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述氧化魔芋葡甘聚糖溶液與殼聚糖季銨鹽溶液的體積比為l-3：1-3。

11.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述氧化魔芋葡甘聚糖溶液與殼聚糖季銨鹽溶液的體積比為l-3：1-3。

12.權利要求1~11任一項所述的制備方法制備得到的負載外泌體的口服結腸靶向給藥的聚合物。

13.包含權利要求12所述的負載外泌體的口服結腸靶向給藥的聚合物的藥物。

14.權利要求12所述的負載外泌體的口服結腸靶向給藥的聚合物在制備用于治療潰瘍性結腸炎的藥物中的應用。