[發明專利]一種GPHB5/GPHA2重組蛋白及其表達載體、制備方法和應用

在審

• 申請號: 202011585506.5
• 申請日: 2020-12-28
• 公開（公告）號: CN112759655A
• 公開（公告）日: 2021-05-07
• 發明（設計）人: 李芳紅;千愛君;趙子建;趙正剛;蕭耿苗;鄧木蘭
• 申請（專利權）人: 廣東工業大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;C12N15/66;C12N15/65;C12N15/85;C12N1/21;A61K38/22;A61P3/04;C12R1/19
• 代理公司: 廣州幫專高智知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 44674
• 代理人: 顏德昊

1.一種GPHB5/GPHA2重組蛋白，其特征在于，表達該GPHB5/GPHA2重組蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1及SEQ ID NO.2所示。

2.一種GPHB5/GPHA2重組蛋白的表達載體，其特征在于，所述表達載體中含有抗博萊霉素的抗性選擇基因，并包含有SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2核苷酸序列。

3.如權利要求2所述的表達載體，其特征在于，所述表達載體優選為pBudCE4.1載體，載體序列如SEQ ID NO.3所示。

4.一種表達權利要求2或3所述的表達載體的宿主菌，其特征在于，所述宿主菌為具有博萊霉素抗性的表達菌株。

5.如權利要求4所述的宿主菌，其特征在于，所述宿主菌優選大腸桿菌E.coli MJ109。

6.如權利要求3所述的表達載體的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

合成表達GPHB5和GPHA2的全基因片段；并對pBudCE4.1載體進行如下處理：GPHB5基因克隆至限制性內切酶Hind III和BamH I酶切位點之間，GPHA2基因克隆至載體的Not I/XhoI位點之間，獲得pBudCE4.1-GPHB5/GPHA2重組質粒。

7.如權利要求1所述的GPHB5/GPHA2重組蛋白的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1、獲得pBudCE4.1-GPHB5/GPHA2重組質粒：利用HindIII/BamHI雙酶切位點將SEQ IDNO:1所示序列插入至表達載體pBudCE4.1中，獲得C端含有His標簽的重組質粒；利用NotI/Xho I雙酶切位點將SEQ ID NO:2所示序列插入至表達載體pBudCE4.1中，獲得C端含有His標簽的重組質粒；

S2、將pBudCE4.1-GPHB5/GPHA2重組質粒為模板轉染至高產量蛋白表達系統進行表達，誘導表達GPHB5/GPHA2重組蛋白。

8.如權利要求7所述的GPHB5/GPHA2重組蛋白的制備方法，其特征在于，在步驟S1之后，還包括將pBudCE4.1-GPHB5/GPHA2重組質粒轉化至MJ109大腸桿菌中，挑取單克隆進行質粒酶切鑒定以及DNA測序方法驗證插入序列的正確性。

9.如權利要求7所述的GPHB5/GPHA2重組蛋白的制備方法，其特征在于，所述高產量蛋白表達系統為HEK293T細胞或Expi293F細胞。

10.如權利要求1所述的GPHB5/GPHA2重組蛋白在制備多肽類減肥藥中的應用。