[發明專利]基于毛細管電泳片段分析和一代測序結合的融合基因核酸檢測方法

在審

• 申請號: 202011585310.6
• 申請日: 2020-12-28
• 公開（公告）號: CN112553306A
• 公開（公告）日: 2021-03-26
• 發明（設計）人: 劉金超;劉孔尚;劉明坤;葉鋒
• 申請（專利權）人: 北京思爾成生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/6827
• 分類號: C12Q1/6827;C12Q1/6869;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 白艷

1.一種檢測多個融合基因的試劑盒，包括多對擴增引物對；

每對所述擴增引物對特異擴增1個所述融合基因的靶序列；

每對所述擴增引物由引物A和引物B組成；

所述引物A從5'端起依次由用于結合測序引物的接頭序列A和與所述融合基因的靶序列特異結合的特異序列A；

所述引物B從5'端起依次由用于調整擴增產物長度的接頭序列B和與所述融合基因的靶序列特異結合的特異序列B；

所述引物A的5’端修飾熒光基團；

所述靶序列為包含融合基因中各基因連接位點的序列。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：

所述熒光基團為FAM、HEX、VIC、TAMRA、ROX或Texred；

或，所述多對擴增引物對中的接頭序列A均相同；

或，所述接頭序列B為多聚A或多聚C。

3.根據權利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于：

每對所述擴增引物中的熒光基團相同或不同。

4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于：

若每對所述擴增引物中的引物A的熒光基團相同，則每對所述擴增引物中的接頭序列B不同；

若每對擴增引物中的引物A的熒光基團不同，則每對所述擴增引物中的接頭序列B相同或不同。

5.根據權利要求1-4中任一所述的試劑盒，其特征在于：

所述試劑盒還包括如下A)、B)和C)：

A)所述測序引物；

B)毛細管電泳片段化檢測試劑及設備；

C)測序檢測試劑和設備。

6.權利要求1-5中任一所述試劑盒在如下至少一種中的應用:

1)檢測融合基因；

2)檢測待測樣本中是否含有融合基因；

3)檢測待測樣本中融合基因的連接序列；

4)檢測待測樣本中融合基因的連接序列是否有突變；

5)制備檢測融合基因產品；

6)制備檢測待測樣本中是否含有融合基因產品；

7)制備檢測待測樣本中融合基因的連接序列產品；

8)制備檢測待測樣本中融合基因的連接序列是否有突變產品。

7.一種檢測待測樣本是否含有融合基因的方法，為非疾病診斷治療目的，包括如下步驟：

1)設計權利要求1-5任一中的所述多對擴增引物對；

2)用所述多對擴增引物對對待測樣本進行多重PCR擴增，得到擴增產物；

3)毛細管電泳片段化檢測所述擴增產物；

若在某個擴增引物對的熒光基團對應的顏色通道內出現預期大小目標片段，則表示該待測樣本含有或候選含有該引物對對應的融合基因，將該待測樣本記作毛細管電泳片段化陽性樣本；

若在某個擴增引物對的熒光基團對應的顏色通道內未出現預期大小目標片段，則表示該待測樣本中不含有或候選不含有該引物對對應的融合基因。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于：所述方法還包括如下：

步驟4)將所述毛細管電泳片段化陽性樣本對應的多重PCR擴增的擴增產物進行測序，根據測序結果判斷待測樣本是否含有融合基因；

所述測序采用的測序引物為權利要求1-5任一中的所述測序引物。

9.一種檢測待測樣本中融合基因的連接序列是否有突變的方法，為非疾病診斷治療目的，包括如下步驟：

1)設計權利要求1-5任一中的所述多對擴增引物對；

2)用所述多對擴增引物對對待測樣本進行多重PCR擴增，得到擴增產物；

3)毛細管電泳片段化檢測所述擴增產物；

若在某個擴增引物對的熒光基團對應的顏色通道內出現預期大小目標片段，則表示該待測樣本含有或候選含有該引物對對應的融合基因，將該待測樣本記作毛細管電泳片段化陽性樣本；

若在某個擴增引物對的熒光基團對應的顏色通道內未出現預期大小目標片段，則表示該待測樣本中不含有或候選不含有該引物對對應的融合基因；

4)將所述毛細管電泳片段化陽性樣本對應的多重PCR擴增的擴增產物進行測序，根據測序結果判斷待測樣本含有的融合基因的連接序列是否突變；

所述測序采用的測序引物為權利要求1-5任一中的所述測序引物。