[發明專利]一種屎腸球菌的發酵方法

在審

• 申請號: 202011581035.0
• 申請日: 2020-12-28
• 公開（公告）號: CN112481174A
• 公開（公告）日: 2021-03-12
• 發明（設計）人: 劉瑋;潘梅;黎昌貴
• 申請（專利權）人: 桂林南藥股份有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/38;C12R1/01
• 代理公司: 北京輕創知識產權代理有限公司 11212
• 代理人: 姚曉麗

本發明公開了一種屎腸球菌的發酵方法，屬于屎腸球菌發酵技術領域。所述屎腸球菌的發酵方法，包括如下步驟：步驟1：菌種活化；步驟2：生長曲線的繪制；步驟3：發酵培養。本發明確定了屎腸球菌發酵所需要的含糖牛肉湯培養基中碳源、氮源和氯化鈉等成分的組成、生長pH值以及發酵培養溫度等參數，可以顯著提高屎腸球菌的生物量，為屎腸球菌工業化發酵生產乳酶生藥劑提供了技術支持。

技術領域

本發明涉及一種屎腸球菌的發酵方法，屬于屎腸球菌發酵技術。

背景技術

乳酶生，英文名稱為Lactasin，別名表飛鳴，是一種白色或淡黃色粉末乳酸菌制劑助消化藥，屬于國家基本藥物，其現行標準收載于1998年版的《衛生部藥品標準》二部第六冊生化藥品第一分冊中。乳酶生在現行標準中歸類于生化藥品，具有微生態活菌制品的特性，可以使腸內糖類酵解，產生乳酸從而抑制腸內產氣。主要用于治療消化不良、腹脹、小兒飲食不當等引起的腹瀉等病癥；也可以用于治療維生素B缺乏癥、幼兒濕疹以及不合理使用抗生素引起的腸內菌群失調紊亂癥。其活性成分為屎腸球菌，屬于動物腸道正常菌群之一，在腸道微生物菌群中占有一定的比例并且與其它腸道益生菌相互協作，共同維持宿主的正常生理功能。

目前世界各國的很多制藥廠大多采用屎腸球菌為主要發酵菌株來生產乳酶生藥劑，各個廠家發酵用的培養基種類繁多，沒有統一標準，培養基中營養成分不能完全適合和滿足該菌株的營養要求，因此導致該菌株發酵過程中出現生物量較低、質量不夠穩定等問題。

發酵培養基各成分之間的比例直接影響發酵結束時菌體量的大小。常用的優化培養基組分之間比例的方法主要有正交試驗、均勻設計和響應面法等，而其中響應面法(Response Surface Methodology,RSM)為常用的統計優化方法。該方法是利用合理的試驗設計進行試驗并得到一些數據，之后采用多元二次回歸方程來擬合因素與響應值之間的函數關系，最后通過對回歸方程的分析來尋找最佳的工藝參數，得以解決多變量問題的一種統計方法。

鑒于此，有必要提供一種屎腸球菌的發酵方法，以解決現有技術的不足。

發明內容

本發明的目的是克服現有技術的不足，提供一種屎腸球菌的發酵方法。本發明確定了屎腸球菌發酵所需要的含糖牛肉湯培養基中碳源、氮源和氯化鈉等成分的組成、生長pH值以及發酵培養溫度等參數，可以顯著提高屎腸球菌的生物量，為屎腸球菌工業化發酵生產乳酶生藥劑提供了技術支持。

本發明解決上述技術問題的技術方案如下：一種屎腸球菌的發酵方法，包括如下步驟：

步驟1：菌種活化

制備含糖牛肉湯培養基，所述含糖牛肉湯培養基由牛肉膏、碳源、氮源和氯化鈉組成，所述牛肉膏濃度為10g/L，所述碳源濃度為20g/L，所述氮源濃度為20g/L，所述氯化鈉濃度為0g/100mL-4.0g/100mL，加蒸餾水定容，調節pH值為4.0-10.0，115℃滅菌20min后所得；

使用無菌接種環挑取-80℃保存的屎腸球菌菌株,接種于含糖牛肉湯培養基上，于溫度為30℃-37℃培養至長出單菌落；

步驟2：生長曲線的繪制

挑取步驟1得到的單菌落，接種于含糖牛肉湯培養基中，于37℃靜置培養12h，然后以1％v/v的接種量接種于100mL含糖牛肉湯培養基中，于37℃靜置培養12h，每隔1h取樣一次，取樣12次，測定在600nm波長下的吸光值，繪制生長曲線；

步驟3：發酵培養

挑取步驟2在含糖牛肉湯培養基上長勢優良的單菌落，接種于裝有40mL 含糖牛肉湯培養基中，于37℃靜置培養12h，吸取種子培養液，以1％v/v的接種量轉接到裝有100mL與含糖牛肉湯培養基中，于37℃靜置培養12h，即得到發酵液。

本發明的屎腸球菌的發酵方法的有益效果是：