[發明專利]一種屎腸球菌的發酵方法

在審

• 申請號: 202011581035.0
• 申請日: 2020-12-28
• 公開（公告）號: CN112481174A
• 公開（公告）日: 2021-03-12
• 發明（設計）人: 劉瑋;潘梅;黎昌貴
• 申請（專利權）人: 桂林南藥股份有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/38;C12R1/01
• 代理公司: 北京輕創知識產權代理有限公司 11212
• 代理人: 姚曉麗

1.一種屎腸球菌的發酵方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟1：菌種活化

制備含糖牛肉湯培養基，所述含糖牛肉湯培養基由牛肉膏、碳源、氮源和氯化鈉組成，所述牛肉膏濃度為10g/L，所述碳源濃度為20g/L，所述氮源濃度為20g/L，所述氯化鈉濃度為0g/100mL-4.0g/100mL，加蒸餾水定容，調節pH值為4.0-10.0，115℃滅菌20min后所得；

使用無菌接種環挑取-80℃保存的屎腸球菌菌株,接種于含糖牛肉湯培養基上，于溫度為30℃-37℃培養至長出單菌落；

步驟2：生長曲線的繪制

挑取步驟1得到的單菌落，接種于含糖牛肉湯培養基中，于37℃靜置培養12h，然后以1％v/v的接種量接種于100mL含糖牛肉湯培養基中，于37℃靜置培養12h，每隔1h取樣一次，取樣12次，測定在600nm波長下的吸光值，繪制生長曲線；

步驟3：發酵培養

挑取步驟2在含糖牛肉湯培養基上長勢優良的單菌落，接種于裝有40mL含糖牛肉湯培養基中，于37℃靜置培養12h，吸取種子培養液，以1％v/v的接種量轉接到裝有100mL與含糖牛肉湯培養基中，于37℃靜置培養12h，即得到發酵液。

2.根據權利要求1所述的屎腸球菌的發酵方法，其特征在于，步驟1中，所述碳源為乳糖、蔗糖、葡萄糖、糖蜜和淀粉中的任意一種。

3.根據權利要求2所述的屎腸球菌的發酵方法，其特征在于，所述碳源為乳糖。

4.根據權利要求1所述的屎腸球菌的發酵方法，其特征在于，步驟1中，所述氮源為胰蛋白胨、玉米漿、尿素、氨水和硫酸銨中的任意一種。

5.根據權利要求4所述的屎腸球菌的發酵方法，其特征在于，所述氮源為胰蛋白胨。

6.根據權利要求1所述的屎腸球菌的發酵方法，其特征在于，步驟1中，所述氯化鈉濃度為0.4g/100mL-0.5g/100mL。

7.根據權利要求1所述的屎腸球菌的發酵方法，其特征在于，步驟1中，所述pH值為7.0-9.0。

8.根據權利要求1-7任一項所述的屎腸球菌的發酵方法，其特征在于，步驟1中，所述溫度為37℃。