[發明專利]一種Cangrelor中間體雜質的HPLC檢測方法

有效

• 申請號: 202011580246.2
• 申請日: 2020-12-28
• 公開（公告）號: CN112630349B
• 公開（公告）日: 2022-12-09
• 發明（設計）人: 丁惠;張欣怡;王華
• 申請（專利權）人: 鹽城師范學院
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/74
• 代理公司: 泉州凡碩知識產權代理有限公司 35257
• 代理人: 張施露

1.一種Cangrelor中間體腺苷-2-硫酮的副產物取代嘌呤和二硫化物含量的HPLC檢測方法，所述方法包括：

a、樣品輔助溶解得到高濃度初始溶液；

b、初始溶液進行液相色譜兼容性稀釋；

c、反相液相色譜進行分離分析，采用的流動相包括：A相，由0.14％Na₃PO₄水溶液構成，pH6；B相，由pH6，0.14％Na₃PO₄甲醇水溶液構成，其中甲醇:水＝1:1，v/v，進行梯度洗脫；

d、按外標法以峰面積計算樣品中取代嘌呤和/或二硫化物的含量，

其中，取代嘌呤為二硫化物為梯度洗脫的程序如下表所示：

2.根據權利要求1所述的方法，其中步驟a中的樣品采二甲基亞砜溶解。

3.根據權利要求1所述的方法，其中步驟b中初始溶液采用含pH6，0.14％Na₃PO₄的甲醇水溶液稀釋，甲醇:水＝1:3，v/v。

4.根據權利要求1所述的方法，其中步驟c中采用的色譜柱為高耐水的鍵合非極性的十八烷基官能團的反相色譜柱。

5.根據權利要求1所述的方法，所述方法包括：

a.樣品初溶

供試品、副產物對照品均精密稱量后，分別溶解于二甲基亞砜，以二甲基亞砜作為助溶劑，配制得到高濃度樣品初始溶液；

b.樣品稀釋

以液相色譜法0min時刻的流動相為稀釋液，稀釋初始溶液，配制得到樣品溶液以及系列對照品溶液，所有制得溶液均用0.22μm微孔濾膜過濾，0min時刻的流動相為含pH6，0.14％Na₃PO₄的甲醇水，其中甲醇:水＝1:3，v/v；

c.采用反相高效液相色譜對標準溶液進行檢測，檢測條件為：

色譜柱：高耐水的鍵合非極性的十八烷基官能團的反相色譜柱；

流動相：A相由pH6，0.14％Na₃PO₄水溶液構成，B相由pH6，0.14％Na₃PO₄甲醇水溶液構成，其中甲醇為色譜級，甲醇:水＝1:1，v/v，梯度洗脫；

檢測波長：260-300nm；

d.按外標法以峰面積計算供試品中副產物的含量。

6.根據權利要求1或5所述的方法，其中步驟a中初始溶液濃度在1-20mg/mL；所述步驟b中對照品溶液是取代嘌呤和二硫化物的其中一種對照品溶液或2種物質的混合溶液。

7.根據權利要求1或5所述的方法，其中步驟b中對照品溶液的濃度范圍為2μg/mL-42μg/mL。

8.根據權利要求1或5所述的方法，其中步驟c中色譜柱的規格為：內徑為4.6mm，長度為150mm，填料粒徑為5μm。

9.根據權利要求1或5所述的方法，其中步驟c中柱溫為15℃-45℃；流動相流速0.8-1.2mL/min。