[發明專利]用于保存生物樣本中核酸的樣本保存液及其使用方法

在審

• 申請號: 202011580147.4
• 申請日: 2020-12-28
• 公開（公告）號: CN112626169A
• 公開（公告）日: 2021-04-09
• 發明（設計）人: 張佳斌;鄒永龍;曲峰;何宗順
• 申請（專利權）人: 蘇州白堊紀生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/24
• 分類號: C12Q1/24
• 代理公司: 北京格允知識產權代理有限公司 11609
• 代理人: 譚輝

本發明提供了一種用于保存生物樣本尤其是唾液樣本中核酸的樣本保存液及其使用方法。所述樣本保存液包含：細胞裂解劑、緩沖劑、螯合劑、鹽離子、抗微生物劑和核酸保護劑。所述樣本保存液可以在環境穩定下保存唾液中DNA和RNA，確保唾液中人類基因組DNA在保存過程中的完整性，即獲得高分子量的DNA，并且快速滅活唾液樣本中的病原體微生物。

技術領域

本發明涉生物樣本保存的領域。更具體地，本發明涉及一種用于保存核酸樣本，特別是用于保存唾液中核酸的樣本保存液和使用方法。

背景技術

1901年Michacles和1903年Kirk用檢測唾液成分作為診斷疾病的輔助工具。人們對于用唾液作為疾病檢測和健康監護的診斷工具的興趣正與日俱增，原因在于其無創可得性、經濟性、樣本易于收集和處理，以及越來越多的科學依據(Yan等,ProteomicsClin.Appl.3:116,2009)。唾液已用于檢測例如齲病風險、牙周炎、口腔癌、乳腺癌、肺癌、干燥綜合征唾液腺疾病和傳染性疾病(如肝炎、HIV和HCV)。因此，唾液是替代血液、血清或血漿的一種吸引人的診斷樣品。

唾液中的白細胞和上皮脫離細胞的基因組成分和血液中的人類基因組是高度一致的，因此，唾液對于核酸分析而言是理想的，現如今唾液樣本已經被認為是大健康基因篩查的重要取材。分析唾液以監測健康狀況和疾病的能力是口腔健康促進與研究的一個非常希望達到的目標。為全面實現唾液作為生物標志物來源的診斷和研究應用，需要在用戶友好的集成型醫療點收集系統中由非專業人員收集、處理及室溫儲存唾液的系統。

保存生物樣本的保存液，經常使用市售UTM保存液，以PBS緩沖液為主體，加入氨基酸、抗生素和BSA等物質保存生物樣本如唾液中的細胞，但是對于細胞樣本中的核酸則不能長期保存。

中國專利申請CN111690642A公開了一種采樣液和保存液用于唾液樣本的保存，所述采樣液包括以下組分：氯化鈉、硫酸氫二鈉、硫酸二氫鉀、氯化鉀、水、苯酚紅；所述保存液包括以下組分：葡萄糖、海藻糖、枸杞多糖、蘆薈多糖、柳硫汞鈉鹽、水。該發明的保存液中加入了海藻糖、枸杞多糖和蘆薈多糖，可極大的減緩核酸在唾液樣本中降解的速度，延長病毒在樣本中存活的時間，保證檢測的準確性。此方案采用兩種溶液，操作繁瑣，優點是可以采集唾液中的活病毒，但是在環境溫度下不能保證唾液中核酸的長時間穩定。

中國專利申請CN111020001A公開了一種新型唾液保存液及其制備方法和應用，包括如下組分：EDTA 1-10mmol/L、Tris-HCl 1-50mmol/L、氯化鈉10-100mmol/L、山梨酸鈉0.1-3％(w/v)、雙乙酸鈉0.1-3％(w/v)、proclin 300 0.01-0.1％(v/v)、TWEEN20 0.1-1％(v/v)、NP40 0.1-1％(w/v)、SDS 0.1-2％(w/v)，此方案可以保存人類唾液中基因組DNA完整性3個月以上，但是并不保存病原體DNA和RNA。

中國專利申請CN111378719A公開了一種用于保存人類唾液中核酸完整性的試劑樣本保存液及其應用和方法。試劑樣本保存液包括尿素、十二烷基硫酸鈉、反式-1，CDTA、Tris-HCl、抗壞血酸鈉、對羥基苯甲酸丙酯、重氮烷基咪唑脲、乙醇、蔗糖和蛋白酶K。將所述試劑樣本保存液與人體唾液混合均勻后常溫保存。此方案可以保存唾液基因組DNA，但依然不能保存唾液中的病原體DNA和RNA。

中國專利申請CN110072999A公開了核酸保護樣本保存液及其制造和使用方法。樣本保存液包括載體、離液劑、緩沖劑、螯合劑、表面活性劑、醇、酸和粘液溶解劑。作為水溶液的樣本保存液可包括水作為載體。優選的實施方案包括水、硫氰酸胍、Tris、EDTA、SLS、SDA3C、HCl和N-乙酰基-L-半胱氨酸。使用方法包括提供包含核酸的生物樣品并使生物樣品與樣本保存液接觸。試劑盒包括置于生物樣品收集裝置的一部分中的樣本保存液。此方案可以保存唾液基因組DNA用于全外測序等，但是該發明并未研究對于唾液中RNA的保存。