[發明專利]一種用納米磁珠提取新冠病毒RNA的試劑盒及提取方法

在審

• 申請號: 202011576764.7
• 申請日: 2020-12-28
• 公開（公告）號: CN112501162A
• 公開（公告）日: 2021-03-16
• 發明（設計）人: 崔大祥;劉澤熙;李雪玲;田靜
• 申請（專利權）人: 上海納米技術及應用國家工程研究中心有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 上海東亞專利商標代理有限公司 31208
• 代理人: 董梅

本發明屬于分子生物學領域，涉及一種用納米磁珠提取病毒RNA的試劑盒及提取方法，具體涉及一種簡易便捷的使用硅羥基生物納米磁珠手動提取以新冠病毒Sars?Cov?2為主要目標的RNA病毒的核酸提取方法。該試劑盒包括溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ、羥基納米磁珠懸浮液和搭配磁珠使用的磁力裝置，其中所述的羥基納米磁珠懸浮液中采用生物納米磁珠硅羥基超順磁性納米磁珠和四氧化三鐵磁核，儲存于NaCl緩沖溶液中。本發明提供了一種針對最新爆發的疫情源頭病毒Sars?Cov?2的核酸提取實施方案，通過提取新冠RNA病毒的核酸以達成應用于下游的擴增測序等后續研究或是公共衛生檢疫流程的目的。

技術領域

本發明屬于分子生物學領域，具體涉及一種用納米磁珠提取新冠病毒RNA的試劑盒及提取方法，一種簡易便捷的使用硅羥基生物納米磁珠手動提取以新冠病毒 Sars-Cov-2為主要目標的RNA病毒的核酸提取方法。

背景技術

由新型冠狀RNA病毒Sars-Cov-2 引起的新冠肺炎covid-19因其強烈的傳染性，在短期內迅速傳播，使突發疫情大流行于全球多達上百個國家及地區，并被WHO（世界衛生組織）列為國際關注的突發公共衛生事件。因此快速檢測感染狀況并對疫情中的人員做隔離管理成為最為有效的方法之一。

目前新冠病毒的檢測方法主要集中于檢測核酸和抗體兩個方面。核酸檢測可用于檢測出處于感染早期窗口中的患者是否攜帶病毒的相應序列。其針對病毒的核糖核酸RNA檢測，具有靈敏度和特異性高，較為便捷安全等優點，是首選的檢測標準。而抗體檢測因為抗體需要在感染患病之后幾天到兩周的時間內逐漸產生特異性抗體，因此更多作為后續的檢測篩查標準。

核酸是酸性的大分子物質，參與了遺傳信息表達，蛋白質反應合成等眾多生物反應，是檢測領域中不可或缺的一類基本物質。現有的核酸提純分離主要是為了將核酸（DNA/RNA）與蛋白質，多糖，鹽類等其他雜質經過試驗步驟分離，得到純化后的核酸分子。在盡量保證其內在結構的完整性不被損壞的前提下，盡可能排除其他污染，同時放大產出。常用方法包括氯仿抽提法，過離心柱法以及磁珠法等。大都需要經過裂解，分離及提純洗滌等諸個步驟。

其中，磁珠法作為相對新發展起來的核酸提取方法，通過對納米微珠顆粒的表面進行優化和修飾后，將其制成具備超順磁性的硅羥基納米磁珠。通過其表面化學官能基團的作用，可以與核酸分子在不同條件（溶液鹽分及pH值的變化調控等）下形成具備特異性的吸附與結合，保留想要得出的純凈核酸成品并以解除吸附的方式再度分離出來。此方法可以避免使用氯仿等有毒的有機溶劑，同時也簡化了部分手工操作，使得實施方法及試劑制備變得相對簡化，同時為儀器高通量的全自動化流程提供了新的可能，在疫情緊要關頭節省更多寶貴的提取檢測時間以便于后續針對性藥物疫苗研究的發展。

但是鑒于技術的限制，目前尚未有使用納米磁珠提取新冠病毒RNA的試劑盒。

發明內容

本發明目的在于提供一種用納米磁珠提取新冠病毒RNA的試劑盒。

本發明的再一目的在于提供一種利用上述試劑盒的提取方法。

一方面，本發明提供了一種用生物納米磁珠法提取病毒RNA的試劑盒，包括溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ、羥基納米磁珠懸浮液；其中：

所述的溶液Ⅰ含有50mmol/L～100mmol/L的三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽Tris-Cl、5mmol/L～20mmol/L的乙二胺四乙酸EDTA、1%～3.5%的聚乙二醇辛基苯基醚Triton X-100、0.1%～1.5%的十二烷基硫酸鈉SDS以及200mmol/L～300mmol/L的氯化鈉；

較好的，所述的溶液Ⅱ含有10mmol/L～100mmol/L的Tris-Cl和5mmol/L～10mmol/L的EDTA；

較好的，所述的溶液Ⅲ含有75%乙醇或者無水乙醇。其中，所述溶液Ⅲ中的75%乙醇可在一些條件下用無水乙醇替代，在加入溶液Ⅲ洗滌的步驟中，乙醇與磁珠懸浮混合溶液的體積比應為2:1。