[發(fā)明專利]一種用納米磁珠提取新冠病毒RNA的試劑盒及提取方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011576764.7
• 申請(qǐng)日: 2020-12-28
• 公開（公告）號(hào): CN112501162A
• 公開（公告）日: 2021-03-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 崔大祥;劉澤熙;李雪玲;田靜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海納米技術(shù)及應(yīng)用國家工程研究中心有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10
• 代理公司: 上海東亞專利商標(biāo)代理有限公司 31208
• 代理人: 董梅

1.一種用生物納米磁珠法提取病毒RNA的試劑盒，其特征在于,該試劑盒包括溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ、羥基納米磁珠懸浮液；其中：

所述的溶液Ⅰ含有50mmol/L～100mmol/L的三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽Tris-Cl、5mmol/L～20mmol/L的乙二胺四乙酸EDTA、1%～3.5%的聚乙二醇辛基苯基醚Triton X-100、0.1%～1.5%的十二烷基硫酸鈉SDS以及200mmol/L～300mmol/L的氯化鈉；

所述的溶液Ⅱ含有10mmol/L～100mmol/L的Tris-Cl和5mmol/L～10mmol/L的EDTA；

所述的溶液Ⅲ含有75%乙醇或者無水乙醇。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述的羥基納米磁珠懸浮液中采用生物納米磁珠硅羥基超順磁性納米磁珠和四氧化三鐵磁核，粒徑范圍為0.5-2.0μm。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，生物納米磁珠硅羥基超順磁性納米磁珠和四氧化三鐵磁核儲(chǔ)存于NaCl緩沖溶液中。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒還含有搭配磁珠使用的磁力裝置。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述的Tris-Cl或者EDTA溶劑pH值為7.2-7.5。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒還含有蛋白酶K或者carrier RNA。

7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任意一項(xiàng)所述的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒還含有去離子水。

8.權(quán)利要求1-6中任意一項(xiàng)所述的試劑盒的應(yīng)用，其特征在于，使用該試劑盒提取新冠病毒RNA。

9.一種用生物納米磁珠法提取病毒RNA的方法，其特征在于，該方法包含以下步驟：

（1）將溶液Ⅰ與蛋白酶K、carrier RNA、硅羥基納米磁珠懸浮液、含有病毒的樣品混合并反應(yīng)，在加熱并得到充分裂解之后使磁珠與核酸吸附結(jié)合，得到混合吸附溶液；

（2）使用溶液Ⅱ、Ⅲ清洗混合吸附溶液，分離需要洗脫的蛋白、多糖雜質(zhì)；

（3）清洗并使核酸脫離吸附，得到純化后的樣品；

所述的溶液Ⅰ含有50mmol/L～100mmol/L的三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽Tris-Cl、5mmol/L～20mmol/L的乙二胺四乙酸EDTA、1%～3.5%的聚乙二醇辛基苯基醚Triton X-100、0.1%～1.5%的十二烷基硫酸鈉SDS以及200mmol/L～300mmol/L的氯化鈉；

所述的溶液Ⅱ含有10mmol/L～100mmol/L的Tris-Cl和5mmol/L～10mmol/L的EDTA；

所述的溶液Ⅲ含有75%乙醇或者無水乙醇。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，包含以下步驟：

S1，在1.5ml離心管中加入20-200μL的含新冠病毒樣本以及100-500μL的溶液Ⅰ，20-100μL蛋白酶K，1-5μL的carrier RNA和10-30μL硅羥基納米磁珠懸浮液，置于55-60°C溫浴加熱10分鐘；

S2，將試管靜置于磁力架上，放置2-3分鐘，待磁珠與核酸吸附，加入250-500μL溶液Ⅱ，充分混勻，吸棄上清；

S3，加入250-500μL溶液Ⅲ，輕微震蕩混勻，靜置于磁力架上2-3分鐘，吸棄上清；

S4，加入溶液Ⅲ，并重復(fù)上述步驟；

S5，加入去離子水，混勻并簡易離心一下，放于55-60℃溫浴5-10分鐘，再置于磁力架上，靜置2-3分鐘，吸取溶液。