[發明專利]乙酰半胱氨酸對映異構體的檢測方法

在審

• 申請號: 202011570144.2
• 申請日: 2020-12-26
• 公開（公告）號: CN114689707A
• 公開（公告）日: 2022-07-01
• 發明（設計）人: 劉紅蓮;丁兆;胡和平;付訓忠;王愛麗;毛靈慧;張吉旺
• 申請（專利權）人: 四川匯宇制藥股份有限公司;四川匯宇海玥醫藥科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/36;G01N30/74;G01N30/86
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 溫可睿

本發明涉及分析檢測技術領域，尤其涉及乙酰半胱氨酸對映異構體的檢測方法。本發明提供的乙酰半胱氨酸對映異構體的檢測方法為將樣品以稀釋劑稀釋后，進行HPLC檢測；所述稀釋劑由乙醇和異丙醇組成；所述HPLC檢測的色譜條件包括：色譜柱為手性柱；流動相由正己烷、異丙醇、乙醇和三氟乙酸組成，等度洗脫。采用本發明提供的方法進行檢測，可以減少樣品的前處理步驟。而檢測結果表明，本發明的方法可以使L?乙酰半胱氨酸和D?乙酰半胱氨酸有更好的分離度，且檢測的準確性、靈敏度、重復性、精密度皆表現良好。

技術領域

本發明涉及分析檢測技術領域，尤其涉及乙酰半胱氨酸對映異構體的檢測方法。

背景技術

乙酰半胱氨酸(Acetylcysteine)為黏液溶解劑，具有較強的黏痰溶解作用。其分子中所含的巰基能使痰液中糖蛋白多肽鏈中的二硫鍵斷裂，從而降低痰液的黏滯性，并使痰液化而易咳出。還能使膿性痰液中的DNA纖維斷裂，因此不僅能溶解白色黏痰，也能溶解膿性痰。乙酰半胱氨酸含有一個手性中心，含有L構型和D構型2種構型，其中L構型為有效構型，D構型應作為雜質控制。

目前，市面上流通的乙酰半胱氨酸藥物劑型包括口服制劑、注射劑、霧化吸入劑。其中，國內上市銷售乙酰半胱氨酸注射液的有3家企業。乙酰半胱氨酸在水溶液中不穩定，酰胺鍵易斷裂，易氧化形成N,N^’-二乙?；?L-胱氨酸，對溫度敏感，高溫下巰基鍵易斷裂降解。異構體乙酰-D-半胱氨酸與乙酰-L-半胱氨酸具有相同的官能團，其理化性質接近，同樣對氧、高溫不穩定。因此，對乙酰半胱氨酸的注射液的質量控制，特別是對異構體的檢測非常重要?，F有的檢測方法中，異構體色譜峰的分離度不足，檢測的準確度偏低。

發明內容

有鑒于此，本發明要解決的技術問題在于提供能夠實現良好分離的乙酰半胱氨酸對映異構體的檢測方法。

本發明提供的乙酰半胱氨酸對映異構體的檢測方法為將樣品以稀釋劑稀釋后，進行HPLC檢測；

所述稀釋劑由乙醇和異丙醇組成；

所述HPLC檢測的色譜條件包括：

色譜柱：手性柱；

流動相：由正己烷、異丙醇、乙醇和三氟乙酸組成，等度洗脫。

本發明提供的色譜條件中，通過改進樣品處理方式，優化色譜條件，實現了乙酰半胱氨酸及其對映異構體的良好分離，且在檢測前無需進行衍生化，避免加熱處理，不僅降低了前處理過程種樣品降解的風險，更簡化了檢測流程。

本發明采用的色譜柱為手性柱，所述色譜柱的填料為表面共價鍵合有直鏈淀粉-三(3-氯-5-甲基苯基氨基甲酸酯)的硅膠。該色譜柱具有良好的溶劑耐受性，例如，其可以耐受乙酰半胱氨酸注射液中的水，因此，可以選擇更有利于檢測的乙酰半胱氨酸注射液的前處理方式。一些實施例中，所述色譜柱為CHIRALPAKIG色譜柱。一些具體實施例中，所述色譜柱的尺寸為4.6×250mm，5μm。

本發明實驗表明，色譜柱的選擇、柱溫以及流動相的選擇對于樣品分離度產生極為顯著的影響。一些實施例中，本發明所述檢測方法中所述色譜柱的柱溫為30℃。本發明所述的檢測方法中，所述流動相的流速為1.5mL/min。流動相洗脫的時間為30min～40min。一些具體實施例中，所述流動相的洗脫時間為30min或40min。

本發明中，所述流動相中，正己烷、異丙醇、乙醇和三氟乙酸的體積比為(88～92):(6～10):2:0.1。

一些實施例中，所述流動相中，正己烷、異丙醇、乙醇和三氟乙酸的體積比為90:8:2:0.1。

另一些實施例中，所述流動相中，正己烷、異丙醇、乙醇和三氟乙酸的體積比為88:10:2:0.1。

另一些實施例中，所述流動相中，正己烷、異丙醇、乙醇和三氟乙酸的體積比為92:6:2:0.1。