[發明專利]一種抗病毒藥物臨床研究血漿樣本中奧司他韋及代謝物奧司他韋酸濃度的生物分析方法

有效

• 申請號: 202011568607.1
• 申請日: 2020-12-25
• 公開（公告）號: CN112730682B
• 公開（公告）日: 2022-06-17
• 發明（設計）人: 楊勇;陳濤;張先鋒;蘇彩娟;周林芳;劉旭凌;鐘勘;姜金方;周茂金
• 申請（專利權）人: 蘇州海科醫藥技術有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京同輝知識產權代理事務所(普通合伙) 11357
• 代理人: 劉洪勛

本發明涉及一種抗病毒藥物臨床研究血漿樣本中奧司他韋及代謝物奧司他韋酸濃度的生物分析方法，通過LC?MS/MS對血漿中奧司他韋及代謝物奧司他韋酸進行分析。本發明方法優選采用蛋白沉淀預處理方法，以奧司他韋?d5和奧司他韋酸?d3為內標，采用Luna PFP色譜柱，梯度洗脫，電噴霧電離源(ESI)串聯質譜檢測。本發明操作簡便、分析速度快、靈敏度高、線性范圍合適，滿足臨床研究大批量樣品分析需求。

技術領域

本發明屬于生物醫藥技術領域，尤其涉及一種抗病毒藥物臨床研究血漿樣本中奧司他韋及代謝物奧司他韋酸濃度的生物分析方法。

背景技術

磷酸奧司他韋是一種病毒神經氨酸酶抑制劑，可以通過降低病毒對靶細胞的穿透力，并抑制病毒的釋放，達到抗病毒的生物效應。磷酸奧司他韋膠囊由瑞士巴塞爾豪夫邁羅氏有限公司開盒吉利德公司聯合開發，1999年經FDA批準上市，商品名為臨床用于治療各類流行性感冒，同時該藥也是世界衛生組織推薦的治療人禽流感的藥物和應對流感大流行的國家儲備藥物。奧司他韋在人體內大部分代謝為活性產物奧司他韋酸。仿制藥臨床研究及治療性藥物監測時需要測定受試者或患者血漿中奧司他韋及奧司他韋酸的濃度以研究其藥動學行為。為了加速其臨床應用，需要一種簡便、準確、快速、靈敏度高的生物分析方法。

目前，液相色譜-串聯質譜技術為分析人血漿中奧司他韋及奧司他韋酸的主要方法。李敬來等2010年開發了測定血漿奧司他韋酸的方法，該法不能測定奧司他韋的濃度。李雪寧等2002年開發液相色譜-熒光法同時測定兩種物質的分析方法，但該法靈敏度較低奧司他韋及奧司他韋酸的分析靈敏度分別為5.00和50.0ng/mL，進而需要受試者提高藥物的服用劑量到300mg才能獲得其藥動學性質，這降低了受試者的安全性。Lindegardh等2007年建立了快速測定血漿中奧司他韋及奧司他韋酸的方法，但該方法的預處理過程采用了復雜且高成本的固相萃取技術，并且分析方法的靈敏度仍然不夠高，奧司他韋及奧司他韋酸的分析靈敏度分別為1.00和10.0ng/mL。Kromdijk等2012年開發的方法靈敏度較低奧司他韋及奧司他韋酸的分析靈敏度分別為3.00和30.0ng/mL，且分析時間較長為9min，不適合大批量臨床研究樣本分析。Zhe-Yi Hu等2012年開發了靈敏度較高的分析方法，定量下限為0.340ng/mL，但該方法采用甲醇為蛋白沉淀法提取試劑，提取后樣品未經水溶液稀釋，容易揮發，不利于保存，且該法分析時間較長為4.5min。另外該法的線性范圍選擇不合適，兩個待測物均為0.340-1000ng/mL，而受試者血漿中奧司他韋酸的濃度水平約為奧司他韋的5-10倍，奧司他韋的定量上限高于其達峰濃度的約10倍，奧司他韋酸的定量下限過低，這不利于樣本的準確分析。

綜上所述，現有技術有以下缺點為無法兼顧、靈敏度、分析速度，且部分技術前處理操作復雜、線性范圍選擇不合理、提取后樣本不易保存等。這些缺點不利于臨床研究大批量樣本的準確分析。

發明內容

為解決上述技術問題，本發明的目的是提供一種抗病毒藥物臨床研究血漿樣本中奧司他韋及代謝物奧司他韋酸濃度的生物分析方法。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種抗病毒藥物臨床研究血漿樣本中奧司他韋及代謝物奧司他韋酸濃度的生物分析方法，包括以下步驟：

預處理，在96孔板中加入血漿，加入內標溶液，加入乙腈:甲醇(1:2，v/v)，渦流及離心后取上清液到另一干凈96孔板中，加入超純水，渦流混勻。

色譜，將待測樣品液相色譜分離，采用Luna PFP色譜柱，梯度洗脫，流動相A為含0.3％甲酸和2mM醋酸銨的水溶液，流動相B為甲醇和乙腈的混合溶液，色譜運行時間3min；