[發(fā)明專利]一種檢測(cè)試紙及制備方法與其在檢測(cè)端粒酶活性中的應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011566182.0
• 申請(qǐng)日: 2020-12-25
• 公開（公告）號(hào): CN112553304A
• 公開（公告）日: 2021-03-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐曉文;張瑞雪
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/6816
• 分類號(hào): C12Q1/6816;C12Q1/48
• 代理公司: 濟(jì)南圣達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37221
• 代理人: 王磊

1.一種檢測(cè)試紙，其特征是，包括依次連接的樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜，所述結(jié)合墊負(fù)載DNA-金納米探針，所述硝酸纖維素膜設(shè)置測(cè)試區(qū)，所述測(cè)試區(qū)內(nèi)固定測(cè)試區(qū)序列；

所述DNA-金納米探針包括探針DNA和金納米粒子，探針DNA的一端與金納米粒子連接，所述探針DNA能夠與端粒酶底物DNA雜交；

所述測(cè)試區(qū)序列是能夠與端粒酶底物DNA催化延伸的序列進(jìn)行雜交的DNA。

2.如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)試紙，其特征是，金納米粒子與探針DNA通過(guò)金-巰鍵結(jié)合的方式連接；

或，金納米粒子表面連接44～48條探針DNA。

3.如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)試紙，其特征是，結(jié)合墊負(fù)載蔗糖；

或，樣品墊內(nèi)含有聚乙烯吡咯烷酮。

4.如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)試紙，其特征是，測(cè)試區(qū)序列通過(guò)鏈霉親和素-生物素與硝酸纖維素膜配合的方式固定在硝酸纖維素膜的測(cè)試區(qū)；

或，所述硝酸纖維素膜設(shè)置空白區(qū)，空白區(qū)固定空白區(qū)序列，端粒酶底物DNA能夠同時(shí)與探針DNA和空白區(qū)序列雜交。

5.如權(quán)利要求1所述的檢測(cè)試紙，其特征是，樣品墊、結(jié)合墊和硝酸纖維素膜的連接處有重疊；

或，包括吸收墊，樣品墊、結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸收墊依次連接；

或，包括底板，樣品墊、結(jié)合墊和硝酸纖維素膜均設(shè)置在底板上。

6.一種權(quán)利要求1所述的檢測(cè)試紙的制備方法，其特征是，包括如下步驟：

提供巰基化的探針DNA，將金納米粒子與巰基化的探針DNA通過(guò)孵育連接獲得DNA-金納米探針，向結(jié)合墊噴涂使DNA-金納米探針的溶液；

提供生物素化的測(cè)試區(qū)序列，將生物素化的測(cè)試區(qū)序列與鏈霉親和素孵育制備鏈霉親和素-生物素化的測(cè)試區(qū)序列，將鏈霉親和素-生物素化的測(cè)試區(qū)序列噴涂至硝酸纖維素膜的測(cè)試區(qū)；

將樣品墊、噴涂使DNA-金納米探針的結(jié)合墊、噴涂鏈霉親和素-生物素化的測(cè)試區(qū)序列的硝酸纖維素膜依次連接獲得。

7.如權(quán)利要求6所述的檢測(cè)試紙的制備方法，其特征是，噴涂使DNA-金納米探針的溶液的量為1.6～2.4μL/cm，DNA-金納米探針的溶液中金納米粒子的濃度為10.4～10.6nM；

或，DNA-金納米探針的溶液中含有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為9.5～10.5％的蔗糖；

或，樣品墊在玻纖溶液中進(jìn)行浸泡并烘干；

優(yōu)選地，玻纖溶液中含有聚乙烯吡咯烷酮；進(jìn)一步優(yōu)選地，聚乙烯吡咯烷酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.4～1.6％。

8.一種權(quán)利要求1所述的檢測(cè)試紙?jiān)跈z測(cè)端粒酶活性和/或可視化檢測(cè)腫瘤細(xì)胞中的應(yīng)用。

9.一種端粒酶活性檢測(cè)試劑盒，其特征是，包括端粒酶底物DNA、權(quán)利要求1所述的檢測(cè)試紙、緩沖液。

10.一種端粒酶活性檢測(cè)方法，其特征是，將待檢測(cè)端粒酶活性的樣品溶液與端粒酶底物DNA溶液混合孵育獲得檢測(cè)溶液，將檢測(cè)溶液滴加至權(quán)利要求1所述的檢測(cè)試紙的樣品墊，觀測(cè)所述檢測(cè)試紙的測(cè)試區(qū)的顏色。