[發(fā)明專利]一種桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)制備牛病毒性腹瀉病毒E2蛋白的方法及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011565641.3
• 申請日: 2020-12-25
• 公開（公告）號: CN112646840B
• 公開（公告）日: 2022-11-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳創(chuàng)夫;何金科;鄧肖玉;王勇;何延華
• 申請（專利權(quán)）人: 石河子大學(xué)
• 主分類號: C12N15/866
• 分類號: C12N15/866;C07K14/18;G01N33/569;G01N33/68;A61K39/12;A61P31/14
• 代理公司: 北京金智普華知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11401
• 代理人: 楊采良

1.一種桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)制備牛病毒性腹瀉病毒E2蛋白的方法，其特征在于，包括以下步驟：

將BVDV-LC E2基因序列前端添加His標(biāo)簽后，連接至pFastBac1質(zhì)粒，得到重組轉(zhuǎn)移載體；

將重組轉(zhuǎn)移載體轉(zhuǎn)化至E.coli DH10Bac^TM中，得到重組桿粒；

用重組桿粒轉(zhuǎn)染Sf9昆蟲細(xì)胞收獲P1代重組桿狀病毒；

將P1代病毒繼續(xù)感染Sf9昆蟲細(xì)胞獲得感染能力高的第二代重組桿狀病毒P2；

再將P2代病毒擴(kuò)大培養(yǎng)后純化得到E2蛋白。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)制備牛病毒性腹瀉病毒E2蛋白的方法，其特征在于：所述BVDV-LC E2基因序列見SEQ ID NO.1所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)制備牛病毒性腹瀉病毒E2蛋白的方法，其特征在于：通過同源重組的方法將重組轉(zhuǎn)移載體轉(zhuǎn)化至E.coli DH10Bac^TM中。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)制備牛病毒性腹瀉病毒E2蛋白的方法，其特征在于：Sf9昆蟲細(xì)胞的培養(yǎng)條件為27℃。

5.利用權(quán)利要求1-4任一所述的方法制備的牛病毒性腹瀉病毒E2蛋白。

6.如權(quán)利要求5所述的E2蛋白在制備用于牛病毒性腹瀉的疫苗或制劑中的應(yīng)用。

7.如權(quán)利要求5所述的E2蛋白在制備BVDV ELISA檢測試劑盒中的應(yīng)用。

8.如權(quán)利要求5所述的E2蛋白在非診斷目的的E2蛋白間接ELISA檢測方法中的應(yīng)用。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于：所述間接ELISA檢測方法中，E2蛋白的最佳包被濃度為5μg/mL，一抗最佳稀釋濃度為1:50，二抗最佳稀釋濃度為1:4000；E2蛋白最佳包被條件為4℃過夜包被；最佳封閉液為5％的脫脂奶粉；最佳反應(yīng)時(shí)間為60min；二抗的最佳反應(yīng)時(shí)間也是60min；底物最佳作用時(shí)間為10min。