[發明專利]一種慢病毒生產方法

在審

• 申請號: 202011565496.9
• 申請日: 2020-12-25
• 公開（公告）號: CN114686447A
• 公開（公告）日: 2022-07-01
• 發明（設計）人: 蔡麗娥;王慶強;王秀秀;吳飛;唐小麗;韓芳婷
• 申請（專利權）人: 上海吉凱基因醫學科技股份有限公司
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00
• 代理公司: 上海光華專利事務所(普通合伙) 31219
• 代理人: 許亦琳;余明偉

本發明涉及慢病毒生產領域，特別是涉及一種慢病毒生產方法，所述方法包括以下步驟：1)將含有慢病毒載體基因組序列的質粒與具有季銨鹽結構的聚陽離子類轉染試劑混合形成轉染液，二者混合的質量體積比為1:2.5～1:3.5；2)將上述轉染液加入培養的細胞中，繼續培養；3)收取細胞培養上清液，即為含慢病毒的培養液。本發明的慢病毒生產方法，降低質粒的用量，優化包裝比例，提高病毒出毒量，同時降低物料成本；簡化生產流程，減少了轉染后6h換液的步驟；采用PEG8000沉淀法濃縮病毒，節約人力成本；重懸后的病毒液可以充分釋放病毒，提高病毒的回收率。提高純化效率，減少機器損耗，保證病毒質量。

技術領域

本發明涉及慢病毒生產領域，特別是涉及一種慢病毒生產方法。

背景技術

現有包裝生產慢病毒工藝多用的是鈣轉染法或是PEI轉染法，試劑在配置過程中需要嚴格調節PH值，質粒需要量大(約58μg)，對細胞的毒性大，需要在轉染后6h換液。現有的純化工藝例如超離純化法耗時耗力，回收率不高，而且要求超速離心機溫度長時間穩定于 4-6℃，實際上超速離心機溫度不穩定，同時超速離心機適配器一次只能離心6管(大管)或12管(小管)，不適合慢病毒的大規模生產。病毒離心后放置4℃無法使病毒粒子完全溶解于重懸液中也會造成病毒的損失。因此降低慢病毒包裝過程中因試劑配制問題造成的出毒量低的風險，同時降低質粒的用量，找到不低于原包裝方法的慢病毒出毒量、低成本、純化流程簡潔、回收率高的生產方法尤為重要。

發明內容

鑒于以上所述現有技術的缺點，本發明的目的在于提供一種慢病毒生產方法，用于解決現有技術中的問題。

為實現上述目的及其他相關目的，本發明提供一種慢病毒生產方法，所述方法包括以下步驟：

1)將含有慢病毒載體基因組序列的質粒與具有季銨鹽結構的聚陽離子類轉染試劑混合形成轉染液，二者混合的質量體積比為1:2.5～1:3.5，單位為μg:μl；

2)將上述轉染液加入培養的細胞中，繼續培養；

3)收取細胞培養上清液，即為含慢病毒的培養液。

如上所述，本發明的慢病毒生產方法，具有以下有益效果：

1、無需配制鈣轉試劑，解決鈣轉試劑因PH調節不合適造成的病毒包裝不穩定的問題。

2、降低質粒的用量，優化包裝比例，提高病毒出毒量，同時降低物料成本。

3、簡化生產流程，減少了轉染后6h換液的步驟；采用PEG8000濃縮純化法濃縮病毒，節約人力成本。

4、重懸后的病毒液可以充分釋放病毒，提高病毒的回收率。

5、提高純化效率，減少機器損耗，保證病毒質量。

附圖說明

圖1-1顯示為鈣轉法包裝病毒的工藝流程表；

圖1-2顯示為PEI法包裝病毒的工藝流程表；

圖1-3顯示為Zymofect 293法包裝病毒的工藝流程表。

圖2顯示為使用Zymofect轉染試劑時不同質粒比例的包裝數據。

圖3顯示為使用Zymofect轉染試劑時不同換液方式及換液量的包裝數據。

圖4顯示為使用Zymofect轉染試劑時是否換液的包裝數據。

圖5顯示為使用Zymofect轉染試劑時質粒總量摸索的數據。

圖6顯示為使用Zymofect轉染試劑時不同樣本不同質粒總量的包裝數據之一。

圖7顯示為使用Zymofect轉染試劑時不同樣本不同質粒總量的包裝數據之一。