[發明專利]一種準確靈敏檢測環境樣品中抗生素的方法

在審

• 申請號: 202011563945.6
• 申請日: 2020-12-25
• 公開（公告）號: CN112505195A
• 公開（公告）日: 2021-03-16
• 發明（設計）人: 黨晉華;王林芳;郭宏
• 申請（專利權）人: 山西省環境科學研究院
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/08;G01N30/72
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 陳征

本發明涉及質譜檢測技術領域，涉及一種準確靈敏檢測環境樣品中抗生素的方法。本發明方法對環境樣品中的液體樣品和固體樣品采用適宜的前處理方法，對前處理后的環境樣品萃取液凈化、氮氣吹干、定容過濾，利用高效液相色譜?質譜聯用技術檢測待測環境樣品中的抗生素種類。本發明方法操作簡單，準確度高，一次操作可實現對環境樣品中殘留的5大分類、26種抗生素的快速、靈敏的檢測，可用于環境中水質、土壤和沉積物的抗生素殘留篩查。

技術領域

本發明涉及環境樣品中抗生素的高效液相色譜質譜檢測技術領域，具體涉及一種準確靈敏檢測環境樣品中抗生素的方法。

背景技術

抗生素主要用于醫療衛生及畜禽養殖、水產養殖行業等，抗生素的廣泛使用，在提高了人們的生活質量的同時也導致其過量使用現象極為普遍。大量的抗生素殘留于環境中并長期積累，對水中微生物群落造成損害并對水生生物造成影響。同時可以破壞生態系統，并通過食物傳送進入人體，對生態、人體健康均存在較高的風險。此外，環境中抗生素的長期殘留能夠提高病菌的耐藥性，對全球健康造成極大的威脅。通過科學的檢測方法對環境中抗生素殘留量進行定量分析，為客觀評估抗生素的風險的同時，進一步研究其遷移轉化等均意義重大。

現有報道中，對土壤及沉積物中抗生素的提取使用超聲提取，緩沖溶液的組分是EDTA-Mcllvaine溶液，通過多次超聲提取后離心合并提取上清液，此方法一則不易控制超聲波水溫，造成樣品提取重現性差，且多次提取，離心，合并等步驟繁瑣，多次更換容器，均存在降低樣品回收效率的風險。

發明內容

本發明的目的是提供一種準確靈敏檢測環境樣品中抗生素的方法，以克服現有技術檢測環境樣品時，檢測限高、抗生素漏檢率高、以及抗生素檢測譜窄的問題。

本發明發現，在對環境樣品的前處理過程中，選擇恰當的富集方法、萃取方式，以及萃取適用的有機溶劑和萃取條件，能夠使待檢測樣品獲得更全面的抗生素富集，并采用高效液相色譜串聯質譜法能夠實現對環境樣品、特別是環境水質、土壤、沉積物中抗生素殘留的準確、快速、靈敏的檢測。

環境中樣品為液體樣品，如環境中的各種水質取樣；固體樣品，如土壤、沉積物等。

若環境樣品為液體樣品，在采集時，將液體樣品加入棕色玻璃瓶中，每1L液體樣品中再加入0.5g Na₂-EDTA，0.1M硫酸調節pH至4.0；加入甲醇10mL。

將采集的樣品置于采樣箱中，當天運回實驗室，運回當天沉積物和土壤樣品從玻璃瓶中轉移出來保存在-20℃的冰柜中，待冷凍干燥和后續的前處理操作；水質樣品當天進行前處理。

本發明實施例中，是將固體樣品運回實驗室后，首先置于冷凍干燥機中冷凍干燥24h，充分去除沉積物水分。干燥好的樣品經適當研磨過10目篩，去除篩上非土成分。為了增大后續ASE提取的比表面積，需要將過10目篩的樣品進一步研磨，然后過60目篩，過篩后裝入自封袋。以備對樣品進行前處理。

具體來講前處理的操作是，(1)若環境樣品為液體樣品，對液體樣品進行前處理的方法是：將液體樣品固相萃取前加入替代物卡巴氧(20μl，濃度為1ug/ml)，固相萃取柱用乙酸乙酯、甲醇、超純水依次活化；萃取后采用甲醇洗脫樣品；或

(2)若環境樣品為固體樣品，對固體樣品進行前處理的方法是：將干燥的固體樣品研磨后采用ASE萃取技術進行前處理，萃取溶劑為EDTA-mellvaine/甲醇。

(3)將前處理后的液體樣品或固體樣品采用高效液相色譜-串聯質譜法LC/MS/MS進行檢測。

EDTA-Mcllvaine溶液配置方法為：37.2g乙二胺四乙酸二鈉、27.5g磷酸氫二鈉和12.9g檸檬酸溶解于1L水中。以EDTA-Mcllvaine溶液與甲醇按8％-12％的體積比混合配制獲得EDTA-mellvaine的甲醇溶液。