[發(fā)明專利]一種準(zhǔn)確靈敏檢測(cè)環(huán)境樣品中抗生素的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011563945.6
• 申請(qǐng)日: 2020-12-25
• 公開（公告）號(hào): CN112505195A
• 公開（公告）日: 2021-03-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黨晉華;王林芳;郭宏
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山西省環(huán)境科學(xué)研究院
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/08;G01N30/72
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 陳征

1.一種準(zhǔn)確靈敏檢測(cè)環(huán)境樣品中抗生素的方法，其特征在于，

(1)若環(huán)境樣品為液體樣品，采集液體樣品后，加入固定劑，然后對(duì)液體樣品進(jìn)行前處理：將液體樣品固相萃取前加入替代物卡巴氧，固相萃取柱用乙酸乙酯、甲醇、超純水依次活化；富集后采用甲醇洗脫樣品；洗脫后加入內(nèi)標(biāo)物，定容；

(2)若環(huán)境樣品為固體樣品，對(duì)固體樣品進(jìn)行前處理的方法是：將干燥的固體樣品研磨后加入替代物卡巴氧，采用ASE萃取技術(shù)進(jìn)行前處理，萃取溶劑為EDTA-mellvaine與甲醇混合配制的溶液；

(3)將前處理后的液體樣品或固體樣品采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法LC/MS/MS進(jìn)行檢測(cè)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，若環(huán)境樣品為液體樣品，在采集液體樣品后，固定劑的加入方法為每1L液體樣品中加入0.5g Na₂-EDTA；0.1M硫酸調(diào)節(jié)pH至4.0；加入甲醇10mL。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述(1)中，乙酸乙酯、甲醇與超純水的用量體積比為(0.7-1.3)：(0.7-1.3)：(1.7-2.3)，固相萃取的控制流速為2.5-3.5mL/min；萃取結(jié)束后用超純水淋洗HLB柱管壁，淋洗結(jié)束后將固相萃取柱真空抽干以去除水分，采用甲醇將樣品洗脫于容器中，每次將甲醇在管內(nèi)停留以充分洗脫抗生素，之后控制流速為0.8-1.2mL/min；

或，所述(2)中，萃取溶劑為含8％-12％EDTA-mellvaine的甲醇溶液，所述％為體積百分比。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述內(nèi)標(biāo)物為磺胺D5、恩氟沙星D5、去甲基金霉素、羅紅霉素D7、氯霉素D5的混合物，優(yōu)選濃度均為500μg/L的內(nèi)標(biāo)混合物；內(nèi)標(biāo)混合物中五者的體積比為1:1:1:1:1。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述(1)中，洗脫后獲得的洗脫液吹至凈干，加入內(nèi)標(biāo)物用初始流動(dòng)相0.5％甲酸-水溶液/乙腈(95/5，V/V)定容，待測(cè)；

或，所述(2)中ASE萃取條件為50±10℃，1500psi，預(yù)熱5min，靜態(tài)萃取10-15min，沖洗體積60％，循環(huán)2次。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一所述的方法，其特征在于，所述(2)中，萃取溶劑為10％EDTA-mellvaine的甲醇溶液，萃取條件為60℃，1500psi，預(yù)熱5min，靜態(tài)萃取10-15min，沖洗體積60％，循環(huán)2次，所述％為體積百分比。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，所述(2)中，還包括將萃取液進(jìn)行凈化和濃縮定容；所述凈化是在萃取液吹至5ml附近后，加入甲醇-水溶液(20/80，V/V)，用HLB小柱富集，用甲醇洗脫，再進(jìn)行氮吹至凈干；

所述濃縮定容是指將凈化液氮吹濃縮至小于0.5ml，再取出繼續(xù)氮吹直至凈干，加入內(nèi)標(biāo)物，用初始流動(dòng)相0.5％甲酸-水溶液/乙腈(95/5，V/V)，定容至1ml，用微孔濾膜過(guò)濾入樣品瓶，得前處理后的待測(cè)樣品；所述內(nèi)標(biāo)物為濃度均為500μg/L的磺胺D5、恩氟沙星D5、去甲基金霉素、羅紅霉素D7、氯霉素D5的內(nèi)標(biāo)混合物，五者體積比為1:1:1:1:1。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，進(jìn)行檢測(cè)的梯度洗脫階段，采用0.1％甲酸-水溶液為A液、乙腈為B液的流動(dòng)相，乙腈的比例分別在0-5min內(nèi)由5％升到30％，5-6min內(nèi)升到35％，6-7min內(nèi)升到40％，7-9min內(nèi)升到60％，9-10min內(nèi)升至95％，10-12min內(nèi)維持在95％，以上百分比均為體積百分比。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述流動(dòng)相的梯度條件為：

10.根據(jù)權(quán)利要求1-9任一所述的方法，其特征在于，采用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法LC/MS/MS進(jìn)行抗生素檢測(cè)的內(nèi)標(biāo)物及替代物的質(zhì)譜條件參數(shù)為：