[發明專利]一種細胞膜片的制備方法及應用

有效

• 申請號: 202011563576.0
• 申請日: 2020-12-25
• 公開（公告）號: CN112604035B
• 公開（公告）日: 2022-12-27
• 發明（設計）人: 詹日興;羅高興;趙小紅;郭熠城;倪文強
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍陸軍軍醫大學第一附屬醫院
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;A61L27/60;A61L27/38
• 代理公司: 重慶華科專利事務所 50123
• 代理人: 康海燕

本發明公開了一種細胞膜片的制備方法及應用，其包括如下步驟：S1，在醫用敷料上涂覆硅膠溶液，靜置、凝固得到硅膠膜，然后進行親水改性處理；S2，表皮干細胞分離培養；S21，取術后皮膚消化、分離，去真皮組織保留表皮組織；S22，將表皮組織粉碎、消化、過濾、離心，收集細胞；S23，以K?SFM或Epilife培養液調整細胞濃度為(1～2)×10⁶個細胞/25cm²，接種于采用Ⅳ型膠原包被處理的培養瓶中，常規培養得到表皮干細胞；S3，取S2中培養對數期的表皮干細胞消化、收集，調整濃度為0.2～0.5×10⁶個細胞/ml，加入到帶有硅膠膜的醫用敷料上，培養制得細胞膜片。其能夠實現細胞在硅膠膜上的均勻一致生長，制得的細胞膜片具有快速促進創面愈合、提高創面愈合質量的作用。

技術領域

本發明涉及組織工程生物材料領域，具體涉及細胞膜片的制備方法及應用。

背景技術

重度燒傷創面修復一直是燒傷醫學研究的難點，皮源匱乏是其根本問題。目前使用的微粒皮移植、MEEK微型皮片移植及自異體皮鑲嵌移植等技術臨床應用可達到1：14(取皮面積1％，可擴增覆蓋14％創面)創面封閉的需要。但這種傳統“拆東墻補西墻”的治療策略需要犧牲大量正常皮膚，以及重度燒傷往往需要進行多次手術封閉創面，重癥監護治療時間長，生命風險高。此外，已有采用皮膚層纖維細胞、臍帶間充質干細胞、多能干細胞和脫細胞真皮基質混合培養后修復創面的研究，但這些研究結果都沒有解決臨床特重癥燒傷患者應用的需求。為此，避免犧牲正常皮膚同時提供足夠皮源的創面封閉方式是現代燒傷醫學的研究重點。

發明內容

本發明的目的是提供一種細胞膜片的制備方法及應用，其能夠實現細胞在硅膠膜上的均勻一致生長，制得的細胞膜片具有快速促進創面愈合、提高創面愈合質量的作用。

本發明所述的細胞膜片的制備方法，其包括如下步驟：

S1，在醫用敷料上涂覆硅膠溶液，靜置、凝固得到硅膠膜，然后進行親水改性處理；

S2，表皮干細胞分離培養；

S21，取術后皮膚消化、分離，去真皮組織保留表皮組織；

S22，將表皮組織粉碎、消化、過濾、離心，收集細胞；

S23，以K-SFM或Epilife培養液調整細胞濃度為(1～2)×10⁶個細胞/25cm²，接種于采用Ⅳ型膠原包被處理的培養瓶中，常規培養得到表皮干細胞；

S3，取S2中培養對數期的表皮干細胞消化、收集，調整濃度為0.2～0.5×10⁶個細胞/ml，加入到帶有硅膠膜的醫用敷料上，培養制得細胞膜片。

進一步，所述S1中的硅膠溶液為A型硅膠和B型硅膠的混合溶液，該混合溶液中A型硅膠和B型硅膠的重量比為1：1。

進一步，所述S1中采用等離子體對醫用敷料表面的硅膠膜進行親水改性處理。

進一步，所述S22的粉碎、消化、過濾、離心具體為：將表皮組織剪碎，在溫度為37℃的條件下用濃度為0.25～0.5％(W/V)的胰蛋白酶溶液消化10～15min，采用含血清1640培養基終止消化，再用200目篩網過濾，然后在轉速為800～1000rpm的條件下離心4～8min。

進一步，所述S23具體為：以K-SFM或Epilife培養液調整細胞濃度為(1～2)×10⁶個細胞/25cm²，接種于采用Ⅳ型膠原包被處理的培養瓶中，常規培養10～15min，吸棄未貼壁細胞；再采用PBS溶液輕洗兩次，更換新的K-SFM或Epilife培養液進行常規培養，次日換液，然后每隔三天換液一次。

上述制備方法的制得的細胞膜片在燒傷創面敷料中的應用。