[發明專利]一種細胞膜片的制備方法及應用

有效

• 申請號: 202011563576.0
• 申請日: 2020-12-25
• 公開（公告）號: CN112604035B
• 公開（公告）日: 2022-12-27
• 發明（設計）人: 詹日興;羅高興;趙小紅;郭熠城;倪文強
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍陸軍軍醫大學第一附屬醫院
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;A61L27/60;A61L27/38
• 代理公司: 重慶華科專利事務所 50123
• 代理人: 康海燕

1.一種細胞膜片的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

S1，在醫用敷料上涂覆硅膠溶液，靜置、凝固得到硅膠膜，然后進行親水改性處理；

S2，表皮干細胞分離培養；

S21，取術后皮膚消化、分離，去真皮組織保留表皮組織；

S22，將表皮組織粉碎、消化、過濾、離心，收集細胞；

S23，以K-SFM或Epilife培養液調整細胞濃度為(1～2)×10⁶個細胞/25cm²，接種于采用Ⅳ型膠原包被處理的培養瓶中，常規培養得到表皮干細胞；

S3，取S2中培養對數期的表皮干細胞消化、收集，調整濃度為0.2~0.5×10⁶個細胞/ml，加入到帶有硅膠膜的醫用敷料上，在溫度為37℃、5%的CO₂的條件下培養制得細胞膜片。

2.根據權利要求1所述的細胞膜片的制備方法，其特征在于：所述S1中的硅膠溶液為A型硅膠和B型硅膠的混合溶液，該混合溶液中A型硅膠和B型硅膠的重量比為1：1。

3.根據權利要求1或2所述的細胞膜片的制備方法，其特征在于：所述S1中采用等離子體對醫用敷料表面的硅膠膜進行親水改性處理。

4.根據權利要求1或2所述的細胞膜片的制備方法，其特征在于，所述S22的粉碎、消化、過濾、離心具體為：將表皮組織剪碎，在溫度為37℃的條件下用濃度為0.25~0.5%（W/V）的胰蛋白酶溶液消化10~15min，采用含血清1640培養基終止消化，再用200目篩網過濾，然后在轉速為800~1000rpm的條件下離心4~8min。

5.根據權利要求1或2所述的細胞膜片的制備方法，其特征在于，所述S23具體為：以K-SFM或Epilife培養液調整細胞濃度為(1～2)×10⁶個細胞/25cm²，接種于采用Ⅳ型膠原包被處理的培養瓶中，常規培養10~15min，吸棄未貼壁細胞；再采用PBS溶液輕洗兩次，更換新的K-SFM或Epilife培養液進行常規培養，次日換液，然后每隔三天換液一次。