[發明專利]一種多發性骨髓瘤合并慢性移植物抗宿主病小鼠模型的建立方法

有效

• 申請號: 202011561662.8
• 申請日: 2020-12-25
• 公開（公告）號: CN112514853B
• 公開（公告）日: 2022-03-08
• 發明（設計）人: 翁建宇;陳曉梅;杜欣;賴沛龍;王玉連;耿素霞;黃欣;曾令基
• 申請（專利權）人: 廣東省人民醫院
• 主分類號: A01K67/027
• 分類號: A01K67/027;C12N15/867;C12N5/10;C12N5/09
• 代理公司: 廣州新諾專利商標事務所有限公司 44100
• 代理人: 劉菁菁

本發明提供一種多發性骨髓瘤合并慢性移植物抗宿主病(cGVHD)小鼠模型的建立方法，依次包括以下步驟：以NOD?SCID?IL2rg?/?小鼠作為模型小鼠；小鼠接受全身輻照100cGy后，將多發性骨髓瘤熒光素酶報告基因細胞株(IM?9)懸液注射至小鼠；小鼠接受注射后8天，將CS1CAR?T細胞懸液通過尾靜脈注射至小鼠體內。該模型造模方法具有模擬臨床上多發性骨髓瘤患者異基因造血干細胞移植后慢性移植物抗宿主病的發生發展特點；過程簡單易行，建模效率高，重復性好，小鼠出現典型的病理改變，為在活體動物內進行防治人類多發性骨髓瘤移植后合并cGVHD的研究提供實驗平臺。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，涉及一種多發性骨髓瘤合并慢性移植物抗宿主病小鼠模型的建立方法。

背景技術

慢性移植物抗宿主病是異基因造血干細胞移植后長期存活患者的主要并發癥，不僅嚴重影響患者的生存質量，也是其死亡的主要原因。進一步明確cGVHD發生機制，探究GVL與GVHD的關系，研究積極有效的治療方法，降低或減輕其發生及病程，具有重要的實際意義。因此，合并多發性骨髓瘤及cGVHD動物模型的建立，是轉化醫學研究的重要基礎。目前大部分小鼠模型為cGVHD小鼠模型或為多發性骨髓瘤模型，尚無累及合并兩種疾病的小鼠模型報道。

發明內容

本發明的目的是提供一種小鼠多發性骨髓瘤合并慢性移植物抗宿主病模型的建立方法。

為了實現上述目的，本發明采用了以下技術方案：

一種小鼠多發性骨髓瘤合并cGVHD模型的建立方法，依次包括以下步驟：

(1)以NOD-SCID-IL2rg-/-小鼠作為模型小鼠；

(2)NOD-SCID-IL2rg-/-小鼠接受全身輻照100cGy后，將多發性骨髓瘤熒光素酶報告基因細胞株(IM-9)懸液注射至NOD-SCID-IL2rg-/-小鼠；

(3)NOD-SCID-IL2rg-/-小鼠接受注射后8天，將CS1CAR-T細胞懸液通過尾靜脈注射至NOD-SCID-IL2rg-/-小鼠體內。

優選地，所述NOD-SCID-IL2rg-/-小鼠為8-10周齡小鼠。

具體來說，所述步驟(2)中，多發性骨髓瘤熒光素酶報告基因細胞株(IM-9)懸液的制備為：24孔板內準備1×10⁶IM-9細胞，加入攜帶Luciferase的慢病毒，感染12h后換液，3天后用嘌呤霉素篩選穩定轉染的細胞，用雙熒光素酶報告基因底物檢測穩轉細胞株內熒光素酶的活性，將穩轉后的細胞株計數并用RPMI-1640重懸細胞，調整至2.5×10⁶/mL細胞濃度備用。

具體來說，攜帶Luciferase的慢病毒的MOI值為30。

優選地，所述步驟(2)中，NOD-SCID-IL2rg-/-小鼠在接受直線加速器100cGy單次全身照射預處理后立即補充飲水，休息4-6小時后經尾靜脈注射終體積為0.4mL的多發性骨髓瘤熒光素酶報告基因細胞株(IM-9)懸液。