[發(fā)明專利]一種人干擾素-κ突變體及其制備方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011560308.3
• 申請(qǐng)日: 2020-12-25
• 公開（公告）號(hào): CN112521480A
• 公開（公告）日: 2021-03-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 彭繼先;錢文正;柴輝;閆韻秋;戴文宇;李振森;于海勤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東晶輝生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/555
• 分類號(hào): C07K14/555;C12N15/20;C12N15/70;C12N1/21;A61K38/21;A61P35/00;A61P31/12;C12R1/19
• 代理公司: 北京中知星原知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11868
• 代理人: 艾變開

1.一種人干擾素kappa(hIFN-κ)突變體，其特征在于，將天然存在的hIFN-κ的氨基酸序列中第166位的半胱氨酸突變?yōu)椴荒苄纬啥蜴I的氨基酸殘基。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的突變體，其特征在于，在所述突變體中，

1)天然存在的hIFN–κ的對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO:1中第166位置上的半胱氨酸替換為20種天然氨基酸中的除半胱氨酸外的其他19種氨基酸中的任一種，優(yōu)選為絲氨酸；或

2)來(lái)源于人且與SEQ ID NO:1具有99％同源性的氨基酸序列的對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO:1的第166位的半胱氨酸替換為20種天然氨基酸中的除半胱氨酸外的其他19種氨基酸中任一種，優(yōu)選為絲氨酸；或

3)所述hIFN-κ突變體的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

3.一種編碼如權(quán)利要求1或2所述的突變體的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。

4.一種核酸構(gòu)建體，其特征在于，所述核酸構(gòu)建體包含權(quán)利要求3所述的核苷酸序列；優(yōu)選地，所述核酸構(gòu)建體為載體；更優(yōu)選地，所述載體為質(zhì)粒載體；最優(yōu)選地，所述質(zhì)粒載體選自pET28a、pET30a、pCZN1、pET22b、pET20b和pET-11c的任意一種。

5.一種重組的基因工程細(xì)胞，其特征在于，所述基因工程細(xì)胞包含權(quán)利要求3所述的核酸分子或包含權(quán)利要求4所述的核酸構(gòu)建體；優(yōu)選地，所述基因工程細(xì)胞為表達(dá)產(chǎn)生所述hIFN-κ突變體的原核宿主細(xì)胞；優(yōu)選地，所述原核宿主細(xì)胞為來(lái)自細(xì)菌的細(xì)胞；更優(yōu)選地，所述原核宿主細(xì)胞為枯草芽孢桿菌細(xì)胞或大腸桿菌細(xì)胞；最優(yōu)選地，所述原核宿主細(xì)胞為大腸桿菌BL21(DE3)的細(xì)胞。

6.一種制備hIFN–κ突變體的方法，其特征在于，所述hIFN–κ突變體通過培養(yǎng)權(quán)利要求5所述的基因工程細(xì)胞獲得。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，包括：

1)培養(yǎng)所述基因工程細(xì)胞，添加IPTG進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)；

2)離心收集菌體，超聲破碎后收集包涵體；

3)鹽酸胍復(fù)性收集獲得hIFN-κ突變體；

4)利用層析純化獲得蛋白。

8.權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法還包括檢測(cè)獲得的hIFN-κ突變體與受體結(jié)合的親和力以及體外的細(xì)胞活性。

9.一種藥物組合物，其包含如權(quán)利要求1或2所述的hIFN-κ突變體。

10.權(quán)利要求1或2所述的hIFN-κ突變體在制備治療病毒感染或腫瘤方面的藥物中的應(yīng)用。