[發明專利]一種提取白術葉片全基因組DNA的方法

在審

• 申請號: 202011557607.1
• 申請日: 2020-12-23
• 公開（公告）號: CN112538476A
• 公開（公告）日: 2021-03-23
• 發明（設計）人: 蔣小剛;張美德;王華
• 申請（專利權）人: 湖北省農業科學院中藥材研究所
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京匯澤知識產權代理有限公司 11228
• 代理人: 徐瑛

本發明屬于分子生物學技術領域，具體提供了一種提取白術葉片全基因組DNA的方法，主要步驟為：用液氮充分研磨白術葉片樣品，經過核分離液解離、CTAB裂解液水浴裂解、蛋白酶消化、氯仿/異戊醇抽提、異丙醇沉淀以及乙醇洗滌、RNA酶處理，快速提取白術全基因組DNA。與改良SDS法相比，用時縮短，DNA濃度增加，質量明顯提高；與DNA提取試劑盒方法相比，用時相當，DNA濃度增加1/2，DNA質量更高，費用卻極大程度降低。解決了現有技術DNA提取質量偏低、提取量較少、程序繁瑣、時間長等問題，能提取高質量白術基因組DNA，為白術種質資源遺傳多樣性分析、種質鑒定、分類等分子生物學研究提供重要技術支持。

技術領域

本發明屬于分子生物學技術領域，具體涉及一種提取白術葉片全基因 組DNA的方法。

背景技術

白術(Atractylodes macrocephala Koidz.)屬于菊科蒼術屬多年生草本植 物，以根莖入藥，具有健脾益氣、燥濕利水、止汗安胎的功效。由于白術 栽培歷史悠久，長時期的不同產區引種及雜交現象使白術出現種質混雜和 質量參差不齊的問題，因此在分子水平上研究白術遺傳多樣性對于白術種 質鑒定和分類至關重要。DNA提取是基于PCR技術的遺傳多樣性分析的前 提，因此研究白術葉片高質、高效的DNA提取方法，對白術DNA分子水平上的研究具有重要意義。

以白術葉片為研究對象，SDS法、常規CTAB法及試劑盒法都能用于提 取白術等藥用植物的基因組DNA，但常規CTAB法、SDS法存在提取DNA 質量偏低、提取量較少、程序繁瑣、時間長等問題。試劑盒法雖然能有效 去除DNA中的多糖多酚物質，但成本較高、提取DNA量較少，同時伴隨 一定降解。

因此通過建立改良的CTAB法，并對改良CTAB法試劑組成、流程、關 鍵步驟進行優化，能提取高質量白術基因組DNA。這為白術種質資源遺傳 多樣性分析、種質鑒定、分類等分子生物學研究提供重要技術支持。

發明內容

本發明的目的是提供一種提取白術全基因組DNA的方法，至少解決現 有技術中存在的部分缺陷。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種提取白術全基因組DNA的方法，該方法包括以下步驟：

(1)用液氮將白術葉片磨成細粉；

(2)向研磨后的細粉中加入核分離液，混勻后離心，棄上清液，收集 沉淀；其中，所述核分離液由如下成分組成：100mmol/L Tris-HCl，50mmol/L EDTA，700mmol/L NaCl，20g/LPVP，4g/L半胱氨酸，40～280mmol/Lβ- 巰基乙醇，且核分離液pH為8.0；

(3)向所述步驟(2)中得到的沉淀中加入CTAB核裂解液和蛋白酶 K，然后水浴；其中，所述CTAB核裂解液由如下成分組成：100mmol/L Tris-HCl，50mmol/L EDTA，1.4mol/LNaCl，20～30g/LCTAB，20g/L PVP， 4g/L半胱氨酸，40～280mmol/Lβ-巰基乙醇；且CTAB核裂解液pH為8.0；

(4)向所述步驟(3)水浴后的混合溶液中加入氯仿-異戊醇混合液， 混勻并離心后，取上清液；

(5)向所述步驟(4)中得到的上清液中加入異丙醇，混勻后于-20℃ 沉淀然后離心，棄上清液，收集DNA沉淀；

(6)向所述步驟(5)中得到的DNA沉淀中加75～95％乙醇洗滌，離 心棄上清液，得到沉淀的DNA；室溫風干，加入含RNAase的TE緩沖液 溶解沉淀，-20℃保存備用。

進一步的，所述步驟(2)中研磨后的細粉與核分離液的用量比為：每200 mg研磨后的細粉中加入1.0～1.5mL核分離液。