[發明專利]一種提取白術葉片全基因組DNA的方法

在審

• 申請號: 202011557607.1
• 申請日: 2020-12-23
• 公開（公告）號: CN112538476A
• 公開（公告）日: 2021-03-23
• 發明（設計）人: 蔣小剛;張美德;王華
• 申請（專利權）人: 湖北省農業科學院中藥材研究所
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京匯澤知識產權代理有限公司 11228
• 代理人: 徐瑛

1.一種提取白術葉片全基因組DNA的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)用液氮將白術葉片磨成細粉；

(2)向研磨后的細粉中加入核分離液，混勻后離心，棄上清液，收集沉淀；其中，所述核分離液由如下成分組成：100mmol/LTris-HCl，50mmol/L EDTA，700mmol/L NaCl，20g/LPVP，4g/L半胱氨酸，40～280mmol/Lβ-巰基乙醇，且核分離液pH為8.0；

(3)向所述步驟(2)中得到的沉淀中加入CTAB核裂解液和蛋白酶K，然后水浴；其中，所述CTAB核裂解液由如下成分組成：100mmol/L Tris-HCl，50mmol/LEDTA，1.4mol/LNaCl，20～30g/LCTAB，20g/LPVP，4g/L半胱氨酸，40～280mmol/Lβ-巰基乙醇；且CTAB核裂解液pH為8.0；

(4)向所述步驟(3)水浴后的混合溶液中加入氯仿-異戊醇混合液，混勻并離心后，取上清液；

(5)向所述步驟(4)中得到的上清液中加入異丙醇，混勻后于-20℃沉淀然后離心，棄上清液，收集DNA沉淀；

(6)向所述步驟(5)中得到的DNA沉淀中加75～95％乙醇洗滌，離心棄上清液，得到沉淀的DNA；室溫風干，加入含RNAase的TE緩沖液溶解沉淀，-20℃保存備用。

2.根據權利要求1所述的提取白術葉片全基因組DNA的方法，其特征在于，所述步驟(2)中研磨后的細粉與核分離液的用量比為：每200mg研磨后的細粉中加入1.0～1.5mL核分離液。

3.根據權利要求1所述的提取白術葉片全基因組DNA的方法，其特征在于，所述CTAB核裂解液和蛋白酶K的用量為：每200mg研磨后的細粉加入800～1000μL CTAB核裂解液和3～5μL蛋白酶K。

4.根據權利要求1所述的提取白術葉片全基因組DNA的方法，其特征在于，所述蛋白酶K的濃度為20～30mg/mL。

5.根據權利要求1所述的提取白術葉片全基因組DNA的方法，其特征在于，所述步驟(3)中水浴溫度為65℃，水浴時間為20min。

6.根據權利要求1所述的提取白術葉片全基因組DNA的方法，其特征在于，所述步驟(4)中氯仿-異戊醇混合液的用量為CTAB核裂解液體積的2/3，且氯仿和異戊醇體積比為24:1。

7.根據權利要求1所述的提取白術葉片全基因組DNA的方法，其特征在于，所述步驟(5)中加入的異丙醇的體積與上清液的體積相同。

8.根據權利要求1所述的提取白術葉片全基因組DNA的方法，其特征在于，所述步驟(5)中沉淀時間為10～15min。

9.根據權利要求1所述的提取白術葉片全基因組DNA的方法，其特征在于，所述步驟(2)(4)(5)的離心條件為：10000～12000r/min，10～15min。

10.根據權利要求1所述的提取白術葉片全基因組DNA的方法，其特征在于，所述步驟(6)中含RNAase的TE緩沖液由如下成分組成：10mmol/L Tris-HCl，1mmol/L EDTA，10mg/mLRNAase；且TE緩沖液的pH為8.0。