[發明專利]本氏煙NbSMG7基因在調控植物抗病毒中的應用及轉基因植物培育方法

有效

• 申請號: 202011557572.1
• 申請日: 2020-12-25
• 公開（公告）號: CN112538488B
• 公開（公告）日: 2022-02-01
• 發明（設計）人: 李方方;陳雅琳;周雪平
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院植物保護研究所
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/82
• 代理公司: 北京東方尚禾專利代理事務所(特殊普通合伙) 11844
• 代理人: 李厚銘

本發明公開了一種本氏煙NbSMG7基因在調控植物抗病毒中的應用及轉基因植物培育方法，所述病毒為黃瓜綠斑駁花葉病毒，NbSMG7基因的轉錄本序列如SEQ ID NO:1所示。本發明通過克隆本氏煙中NbSMG7基因，將其構建為帶有熒光標簽的YFP?NbSMG7載體，將YFP?NbSMG7載體轉入農桿菌后侵染煙草進行煙草的遺傳轉化，獲得YFP?NbSMG7轉基因植物。獲得的本氏煙過表達YFP?NbSMG7植物能夠顯著阻礙黃瓜綠斑駁花葉病毒的侵染。

技術領域

本發明涉及基因工程技術領域，特別是涉及一種可穩定遺傳的、抗黃瓜綠斑駁花葉病毒的NbSMG7轉基因植物的培育方法。

背景技術

黃瓜綠斑駁花葉病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)屬帚狀病毒科(Virgaviridae)煙草花葉病毒屬(Tobamovirus)，可以侵染黃瓜、葫蘆、甜瓜、西瓜等葫蘆科作物，造成植株生長遲緩、葉片褪綠斑駁、果實變色和纖維化，導致嚴重損失，是我國重要的植物檢疫性有害生物。

CGMMV是正義單鏈RNA病毒，全長約6400nt，編碼4個蛋白，分別為129kD的復制酶、186kD的復制相關蛋白、29kD運動蛋白和17.4kD的外殼蛋白。

CGMMV對葫蘆科作物上的危害是世界性難題，目前沒有有效的化學藥劑可防治CGMMV。通過保守的方法可以在一定程度上減輕CGMMV的為害，如使用消毒種子、通過改進栽培技術培育健壯植株、田間及時鏟除發病單株、利用殺蟲劑切斷病毒的傳播載體等。但是現階段仍未有針對CGMMV有防治效果的藥劑及抗病植株被開發出來，且已有研究表明種子處理措施效率不高且不穩定。另外，嫁接技術一直以來是葫蘆科作物在生產中普遍應用的農事操作技術，也是防治病蟲害的有力措施之一，然而有報道稱CGMMV可從西瓜砧木中運輸到其接穗中，從而使得CGMMV通過嫁接傳播而潛在地成為田間的初侵染來源。

發明內容

本發明的第一目的是提供一種本氏煙NbSMG7基因在調控植物抗病毒中的應用。

本發明的第二目的是提供一種本氏煙NbSMG7高表達植物的培育方法。

為實現上述目的，本發明采用的技術方案具體如下：

本氏煙NbSMG7基因在調控植物抗病毒中的應用，其中，所述病毒為黃瓜綠斑駁花葉病毒。

具體的，通過克隆本氏煙中NbSMG7基因，將其構建為帶有熒光標簽的YFP-NbSMG7載體，將YFP-NbSMG7載體轉入農桿菌后侵染煙草進行煙草的遺傳轉化，獲得的本氏煙過表達YFP-NbSMG7植物能夠顯著阻礙黃瓜綠斑駁花葉病毒的侵染。

其中，所述NbSMG7的轉錄本序列如SEQ ID NO:1所示。

一種抗黃瓜綠斑駁花葉病毒的NbSMG7轉基因植物的培育方法：通過農桿菌轉化的方法，將NbSMG7基因導入目的植物中，獲得本氏煙NbSMG7高表達的轉基因植物。

具體包括以下步驟：

(1)獲得本氏煙植株，用Trizol法從本氏煙植株葉片中提取RNA，去除RNA樣品中基因組DNA，并反轉錄得到cDNA；

(2)利用引物對NbSMG7-F和NbSMG7-R，如SEQ ID NO:2-3所示，以cDNA為模板進行PCR擴增，所使用的引物序列為：

NbSMG7-F：atgatgaccattccaatgga，

NbSMG7-R：cacaaacaaacggccttc；

(3)將擴增產物構建到n-YFP載體上，獲得YFP-NbSMG7重組質粒；