[發明專利]一種同步檢測六種霉菌毒素的試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 202011556600.8
• 申請日: 2020-12-23
• 公開（公告）號: CN114660294B
• 公開（公告）日: 2023-07-04
• 發明（設計）人: 陳義強;金永鵬;劉穎;張婉君
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/558;G01N33/543;G01N33/53
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 陳征

本發明提供了一種同步檢測六種霉菌毒素的試劑盒及其應用，本發明的試劑盒含有檢測試紙條和檢測試劑，所述檢測試紙條有6條檢測線和一條質控線，每條檢測線上包被1種霉菌毒素抗原，所述檢測試劑為與六種霉菌毒素標志物的單抗結合形成的六種納米金復合物，六種霉菌毒素分別為黃曲霉毒素B₁、赭曲霉毒素、玉米赤霉烯酮、伏馬毒素B₁、T?2毒素和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇。將待測樣品加入檢測試劑中，用檢測試紙條測定，可用于玉米、小麥、配合飼料等樣品中六種霉菌毒素的同步快速篩檢，對各霉菌毒素的檢測限均低于我國飼料衛生標準限量要求，同時該試紙條還具有檢測成本低、檢測速度快等優點，可適用于霉菌毒素的現場快速監測。

技術領域

本發明涉及膠體金檢測技術領域，尤其是涉及一種同步檢測六種霉菌毒素的試劑盒及其應用。

背景技術

霉菌毒素是一類由產毒真菌在適宜的環境條件下產生的有毒代謝產物，廣泛存在于農作物中。由于霉菌毒素具有致癌性、腎毒性、神經毒性、免疫抑制和類雌激素作用等潛在的毒性作用，因此，可對人類和動物健康產生嚴重的危害。目前霉菌毒素在農作物中的污染已成為一個全球性的問題。全球每年約有25％的農作物遭受霉菌毒素的污染，約有2％的農作物因污染嚴重而失去營養和經濟價值，造成的直接和間接經濟損失達到數百億美元。飼料原料主要來源于農作物，因此霉菌毒素是飼料中常見污染物之一。飼料中主要的霉菌毒素有黃曲霉毒素B1(AFB₁)、赭曲霉毒素(OTA)、玉米赤霉烯酮(ZEA)、伏馬毒素B₁(FB₁)、T-2毒素(T-2)和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)等，攝入霉菌毒素污染的飼料可引起畜禽攝食量減少、飼料轉換率降低、免疫功能低下、生產和繁殖性能下降等癥狀，因而會嚴重降低畜禽的生產效率和經濟回報。同時，飼料中霉菌毒素的污染可導致其在動物源性食品如肉、蛋、奶中蓄積，從而對消費者的健康造成潛在的危害。因此，監控飼料中霉菌毒素的污染水平對保障動物和消費者健康具有重要意義。

目前國內外用于霉菌毒素檢測的分析方法主要分為兩大類：儀器分析方法和免疫分析方法。儀器方法主要包括液相色譜法、氣相色譜法、毛細管電泳法、液相色譜-質譜法和氣相色譜-質譜法等，這些方法具有較高的準確度和精確度，常用于霉菌毒素的定量和確證分析，但是通常需要在實驗室環境運行，并且需要昂貴的儀器和配備專業的技術人員，同時在進行儀器分析之前，需要對樣品進行繁瑣的前處理，通常需要數小時或數十小時才能完成。因此，儀器分析方法不適合于基層實驗室和現場環境霉菌毒素的快速檢測。

免疫分析方法主要包括熒光光度法、熒光偏振免疫測定法、酶聯免疫測定法和膠體金免疫層析法等，由于其操作簡便、快速、檢測成本低和不需要昂貴儀器等特點，目前廣泛用于霉菌毒素的篩查。但是，這些方法一次只能檢測一種霉菌毒素，不能對多種霉菌毒素進行同步檢測。飼料原料來源廣泛，同一飼料樣品中可能污染多種霉菌毒素，因此，研究開發霉菌毒素的多組分免疫分析方法可顯著提高檢測效率，降低檢測成本，為飼料中霉菌毒素的污染監測提供更為有效的手段。

發明內容

本發明的目的在于提供一種同時檢測六種霉菌毒素的試劑盒及其應用，用于快速、準確、靈敏地檢測食品或飼料中的黃曲霉毒素B₁(AFB₁)、赭曲霉毒素(OTA)、玉米赤霉烯酮(ZEA)、T-2毒素(T-2)、伏馬毒素(FB₁)和脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)。

本發明首先提供一種同步檢測上述六種霉菌毒素的試劑盒，該試劑盒含有檢測試紙條和檢測試劑；所述檢測試紙條為側流免疫層析檢測試紙條，包括樣品墊、硝酸纖維素膜、吸收墊和襯板；所述硝酸纖維素膜上設置6條檢測線和1條質控線，每條檢測線上包被1種抗原；所述檢測試劑為所述六種霉菌毒素的單抗分別與納米金結合的納米金-抗體復合物的混合溶液。

本發明的試劑盒中，所述檢測線上包被的抗原為六種霉菌毒素抗原分別與載體蛋白偶聯的抗原，所述載體蛋白為BSA、OVA或KLH；所述質控線噴涂有羊抗鼠二抗。