[發明專利]一種附子理中制劑差異化合物的質量分析方法

有效

• 申請號: 202011554329.4
• 申請日: 2020-12-24
• 公開（公告）號: CN112763606B
• 公開（公告）日: 2022-07-08
• 發明（設計）人: 張臻;林夏;黃友;楊莎莎;魏馨怡;傅超美;李銳;章津銘
• 申請（專利權）人: 成都中醫藥大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/72;G01N30/86
• 代理公司: 四川力久律師事務所 51221
• 代理人: 劉雪蓮

1.一種附子理中制劑差異化合物的質量分析方法，其特征在于，

樣品檢測：將附子理中丸劑樣品和附子理中湯劑樣品分別采用高效液相色譜-四極桿-靜電場軌道阱高分辨質譜儀UPLC-Q-Exactive-MS進行檢測；預處理：通過Xcalibur軟件及Compound Discoverer軟件對所述附子理中丸劑樣品、所述附子理中湯劑樣品檢測得到的總離子流圖和質譜數據進行預處理得到樣品文件；具體的，將所述高效液相色譜-四極桿-靜電場軌道阱高分辨質譜儀UPLC-Q-Exactive-MS檢測得到的總離子流圖和質譜信息，在所述Xcalibur軟件中進行色譜圖優化處理，得到色譜圖信號表、各峰保留時間及峰面積信息；所述優化處理包括平滑曲線以及基線扣除；

采用高效液相色譜-四極桿-靜電場軌道阱高分辨質譜儀UPLC-Q-Exactive-MS進行樣品檢測過程中，設置參數如下：

色譜條件：

色譜柱為Waters ACQUITY UPLC BEH-C18，50 mm×2.1 mm，1.7 μm；

流動相A為0.1% 甲酸水溶液，流動相B為0.1% 甲酸乙腈溶液；

梯度洗脫順序為：0-15min，95-70%的流動相A；15-30min，70-48%的流動相A；30-45min，48-25%的流動相A；45-48min，25-15%的流動相A；48-55min，15-2%的流動相A；55-65min，2-2%的流動相A；

流速為1.0mL/min，柱溫為35℃，進樣量為10μL；

質譜條件：

帶鞘流氣的電噴霧電離源ESI，正離子掃描；干燥氣為N₂，氣體流量8.0 L/min，霧化氣溫325 ℃，噴霧器壓40 psig，鞘流氣溫度350 ℃，鞘流氣流量11 L/min，毛細管電壓4000 V，Skimmer 65 V，OCT1 RFVpp 750 V，裂解電壓110 V，化合物定性時二級質譜碰撞能量設置為10，20，30，40 V，數據采集范圍m/z 50～1200 Da；

組內差異化合物分析：將多批次所述附子理中丸劑樣品的樣品文件導入至中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統中，進行組內差異化合物分析，確定附子理中丸劑樣品的共有成分；將多批次所述附子理中湯劑樣品的樣品文件導入至中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統中，進行組內差異化合物分析，確定附子理中湯劑樣品的共有成分；具體的，將多個批次的附子理中丸劑樣品的樣品文件導入至中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統中，設置參照圖譜和時間窗寬度，再進行多點矯正以及峰匹配，所述峰匹配設置為全譜峰匹配，最后導出匹配數據，通過匹配數據得到了不同批次的穩定的共有成分的數據信息；所述多個批次的附子理中湯劑樣品的樣品文件組內差異化合物分析步驟與所述附子理中丸劑樣品的樣品文件分析步驟相同；

主成分分析和最小偏二乘判別分析：通過SIMCA軟件對附子理中丸劑樣品的共有成分、附子理中湯劑樣品的共有成分，依次進行主成分分析和最小偏二乘判別分析，得到最終的差異化合物；具體的，將所述附子理中丸劑樣品的共有成分和所述附子理中湯劑樣品的共有成分數據信息導入至SIMCA軟件中建立數據庫，將所述數據庫分為附子理中丸組和附子理中湯組，并且分別對共有成分進行編號，然后采用主成分分析模型初步分析組間各成分含量的差異性，接著采用PLS-DA中的變量載荷評價參數值確定造成組間差異的因素，最終得到40個差異化合物。